脑缺血再灌注损后HIF-1α对脉络丛细胞的修复作用.pdfVIP

中文摘 英文摘 研究论 日U 材 结 附 附 讨 结 参 综述 致谢… 个人简 中文摘要 脑缺血再灌注损伤后…F-1Q对脉络丛细胞 的修复作用 摘 要 目的： 建立大鼠脑缺血再灌注模型并将体外合成HIF．1a质粒通过颈外．颈 内动脉途径注射入大鼠脑组织中，应用透射电子显微镜观察大鼠脉络丛组 器及细胞间连接的超微结构改变，以及外源性HIF．1a基因介导的细胞修 复情况；探索外源性HIF．1a基因对脑缺血再灌注损伤的保护机制。 方法： 隆片段大小：2．5kb；酶切鉴定重组子，根据需要体外扩增。 性SD大鼠以10％水合氯醛腹腔麻醉，颈部正中切开，分离暴露颈总动脉 分叉部，经颈外动脉向颈内动脉插入线栓，颈外动脉远端丝线结扎，线栓 头端距血管分叉处1．8cm，线栓阻塞大脑中动脉。大鼠神经功能缺失评分 按Zea Longa Longa评分标准进行评分，MCAO模型建立2h后，选取Zea 对照组注入PBS。 与对照组大鼠处死后断头取脑后，视交叉后做2ram厚连续切片，第一片 la 做TTC染色，其余做石蜡包埋，5m厚连续石蜡切片，行HE染色。 4取相同时间点大鼠侧脑室脉络丛组织；低温下迅速取材以4％戊二醛浸 泡固定2h(4℃)，用0．1mol／LPBS洗涤，1％锇酸固定2h(室温)，常规 u 切片机做O．5m厚半薄切片，经1％甲苯胺蓝．天青II染色，光镜下定位 透射电镜观察脑组织的超微形态学改变，了解侧脑室脉络丛的损伤变化情 次。。 中文摘要 1 5统计学分析：使用SPSS5．0统计软件对实验数据进行统计学分析。组 间计量资料比较采用t检验，以P0．05表示差异有统计学意义。 结果： ID： 2大鼠神经功能缺失评分按Zea 组与对照组在死亡率上无明显差别，神经功能缺失评分上实验组与对照组 无明显差别。 面积无明显差别，再灌注72h以后可见实验组梗塞面积小于对照组。 4HIF．1a对脑缺血再灌注损伤大鼠脉络丛组织(脏染色)形态学变化的影 响：缺血再灌注6h后及12h后，脉络丛组织形态结构尚完整，上皮细胞排 列整齐，无明显细胞水肿，细胞间隙大小基本正常，局部可见淋巴细胞浸 润，此时治疗组与对照组脉络丛组织大致形态上无明显区别。脉络丛轮廓 存在，大体结构完整，’局部可见上皮细胞间隙增宽。缺血再灌注24h后， 神经组织病理性改变较前面时间点加重，脉络丛结构松散，细胞间隙扩大， 脉络丛上皮细胞高度水肿，部分细胞出现凋亡改变，血管内皮细胞肿胀， 部分血管内皮断裂，脉络丛结构完整性破坏，此时间点观察到mF．10【质粒 治疗组破坏程度轻于PBS对照组。缺血再灌注72h后，脉络丛上皮细胞凋 亡减少，水肿程度未见减轻，与PBS对照组相比HIF．1a质粒治疗组细胞间 隙没有进一步增宽，且内皮细胞