一株新型产纤维酶菌株的鉴定、纤维素酶的分离纯化、性质分析和菌株应用.pdfVIP

摘盟 摘要 对来自传统发酵食物中的菌株进行分离，得到一种具有高产纤维素酶活力 的菌株。对该菌株所产纤维素酶进行分离、纯化、酶学性质分析，并对豆渣发 酵前后其营养成分的变化和可溶性多糖提取进行了初步研究。 对分离所得的菌株进行菌丝和孢子显微形态观察，发现其形态具有面包串 珠霉(Monilia 考察了液体发酵面包串珠霉Mc—l产纤维素酶的影响因素(培养基组成及产 酶发酵条件)。通过单因素实验确定产酶培养基，得出较佳培养基组成为：O．3％ 碳源(稻草粉：甘蔗渣=4：1)、2％氮源(酵母膏：蛋白胨=1：2)、0．08％硫 酸镁和0．2％磷酸二氢钾。通过对产酶条件进行优化，确定了菌株MC一1的较佳 培养条件：孢子接种量10ml、培养温度28．30℃、初始pH值4．8及培养时间为 6天。 G一200凝胶层析、DEAE． 通过20％一65％的硫酸铵的分级沉淀、Sephadex 到的纤维素酶样品和低分子量标准蛋白进行SDS—PAGE电泳，发现菌株MC。l产的 KD，64．8KD和22．IKD。对此3种纤维素酶进行 C1，BG和ICx分子量分别为31．9 酶学性质分析，结果表明Cx酶最适温度为45℃，在30～60℃条件下保持lh基本稳 定，最佳pH为5．0，在pH4．5～5．5范围内酶活基本稳定：C1酶最适温度为55℃， 为4．5，在pH4．0--6．0范围内酶活基本稳定。会属离子对该三种酶活力有一定的 对C1和Cx酶有抑制作用，而对B—G酶具有一定的促进作用；而Cu”、A13+、zn2+、 Ca2+和Cr¨对三种酶活力均为显著的抑制作用。 豆渣经面包串珠霉发酵前后，发现其异黄酮、粗纤维、蛋白质、水溶性固 形物等成分发生较大变化：发酵豆渣中的粗纤维的含量23．8％，与新鲜豆渣 (35．5％)相比含量降低了35．2％；而水溶性固形物的含量高达36．98％，比新 鲜豆渣(7．54％)升高了近5倍；异黄酮和蛋白质的含量分别为0．66mg／g和 32．59％，比新鲜豆渣(分别为0．60mg／g和24．66％)升高了lo％fn32％。表明面 包串珠霉可以显著改变豆渣中营养和功能性成分，改善其加工特性。 论文还研究了豆渣在面包串珠霉MC—l发酵前后总糖、还原糖及低聚糖的提 取工艺，并对直接水浸提法、酶解法和液体发酵法提取可溶性糖进行了比较。 通过对单因素梯度实验结果，新鲜豆渣提取可溶性糖的浸提条件：1％氢氧化钠 溶液、浸提温度为65。C、浸提时间为2h及固液比为l：100。在此条件下，新 鲜豆渣浸提后，总糖提取率为68．76mg／g，还原糖提取率为5．59mg／g，低聚糖 提取率为63．17 mg／g；发酵豆渣提取可溶性糖的浸提条件：1％氢氧化钠溶液、 浸提温度为75。C、浸提时间为2h及固液比为l：500。在此条件下，发酵豆渣 率为107．91mg／g。 关键词：豆渣发酵纤维素酶提纯酶学性质可溶性糖 ABSTRACT ABSTRACT Anewstrainwhichcan cellulaseswith was produce highenzymicactivity isolatedfromafermentedtraditionalfoodin and iiangxiprovince．Theseparation ofthe celhilasesfron]thenewstralnwere andthe purification investigatedenzymic were nutritionalconstituentalterationintheresidue properties