再生障碍性贫血者骨髓间充质干细胞生物学特性及成脂分化异常研究.pdfVIP

中国协和医科大学博士研究生论文 第三页 中文摘要 再生障碍性贫血(hA)系多种病因引起的造血障碍，导致红骨髓总容量减少 代以脂肪髓，造血衰竭，临床以全血细胞减少为主要表现的一组综合征。骨髓问 充质干细胞(MSC)是中胚层起源的原始细胞，是骨髓基质细胞系的干祖细胞，是 骨髓微环境的重要组成部分，本研究体外分离和培养AA患者的骨髓MSC，观察其 形态，研究其生长特性、表面标志、分化潜能等，进而对AA患者的骨髓造血微 环境作进一步的研究。 第一部分研究再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(Msc)生物学特 性的改变。取AA患者和对照组骨髓的MSC，测定其生长曲线和倍增时间，流 式细胞仪检测其免疫表型，进行纤维母细胞集落形成单位(CFU．F)计数，比较 骨髓MSC融合单层对健康人骨髓CFU—GM的生长支持作用，取上述所得的单克隆 来源扩增细胞分别向脂肪、成骨、内皮、神经定向诱导。 AA组细胞倍增时间长于对照组，CFU．F低于对照组，AA组对健康人骨髓CFU—GM 的刺激作用较正常对照组明显减弱。通过我们对从患者Msc的生物学特性的初 步研究， AA的MSC的表型与已知正常成人的MSC一致，并保持多向分化潜能， 但其生长明显缓慢，对造血的支持作用较差，存在生长数量缺陷和质量缺陷，可 能导致AA的骨髓造血微环境缺陷。 第二部分研究从患者骨髓脂肪化的原因。骨髓脂肪化是AA骨髓最显著的病 理特征，其造血细胞显著减少而取代为大量的脂肪细胞。已证明在体内成骨细胞 可能调节造血干祖细胞“龛位”的主要因素，由于MSC是成骨细胞和脂肪细胞共 中国协和医科大学博士研究生论文 第4页 同的干祖细胞， 我们推测AuA患者的骨髓的脂肪来源于MSC的异常的成脂分化， 继而成骨分化受抑，导致HSC龛位的减少，最终参与引起造血功能衰竭。我们在 脂肪诱导体系中观察比较AA和正常成人骨髓MSC成脂分化的过程，并用Rea] time PCR比较从组和对照组脂蛋白脂酶(LPL)的相对表达。结果表明，AA患 者的骨髓MSC较正常人的形成脂滴早，LPL基因的早期(7天，pO．叭)和中期 能是从患者的骨髓脂肪化的主要原因。 该研究首次系统地探讨再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞生物学特性 的改变，其异常可能是导致AA患者造血微环境异常的主要原因。 I关键词1． 再生障碍性贫血，间充质干细胞，脂肪细胞，分化 中国协和医科大学博士研究生论文 第三页 Abstract Normal issustainedinteractionsbetweenstem haemotopoiesisby cellsand stroma．In basic structureofthebone aplasticanemia(AA)，the marrow(BM) becomes abnormal：cellsfor blood responsiblegeneratingcells(hematopoieticcells) are decreasedinnumberandare fat greatly replacedby cells． MicroenviromnentofBM isconstitutedwithstromM and cells，adipocytes derivedfromthe osteoblasts，all