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中华人民共和国国家标准 GB 5413.14—2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B12 的测定 National food safety standard Determination of vitamin B12 in foods for infants and young children, milk and milk products 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中华人民共和国卫生部 发布 GB 5413.14—2010 前 言 本标准代替GB/T 5413.14-1997 《婴幼儿食品和乳粉维生素B12的测定》。 本标准与GB/T 5413.14-1997相比，主要变化如下： ——标准名称改为《婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定》。 本标准附录A为规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： ——GB 5413-1985 、GB/T 5413.14-1997 。 I GB 5413.14—2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素 B12 的测定 1 范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素 B12 的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素 B12 的测定。 2 规范性引用文件 本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。 3 原理 利用莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii ）对维生素B12 的特异性和灵敏性，定量测定出 试样中维生素 B12 的含量。在测定用培养基中供给除维生素B12 以外的所有营养成分，这样微生物生长 产生的透光率就会同标准曲线工作液及未知待测溶液中维生素 B12 的含量相对应。以不同浓度标准溶液 的透光率相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，根据标准曲线即可计算出试样中维生素B12 的含量。 4 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。 4.1 菌株：莱士曼氏乳酸杆菌（Lactobacillus leichmannii ）ATCC 7830 。 4.2 维生素 B12 （Vitamin B12 或 Cyanocobalamin ）标准品：分子式 C63H88CoN14O14P ，纯度≥99% 。 4.3 培养基 4.3.1 乳酸杆菌琼脂培养基：见附录 A 。 4.3.2 乳酸杆菌肉汤培养基：见附录 A 。 4.3.3 维生素 B12 测定用培养基：见附录 A 。 注：一些商品化合成培养基效果良好，商品化合成培养基按标签说明进行配制。 4.4 9 g/L 氯化钠溶液（生理盐水） 称取 9.0 g 氯化钠溶解于 1000 mL 水中，分装于具塞试管，每管 10 mL。121 ℃灭菌 15 min。 4.5 乙醇溶液：体积分数为25 % 。 4.6 无水磷酸氢二钠（Na HPO ）。 2 4 4.7