基因工程实验-湖北大学生命科学学院.docVIP

附件3 湖北大学 基因工程实验 （0704410193） 实验教学大纲 （第2版） 生命科学学院 生物学实验教学中心 2010年7月 前 言 课程名称：基因工程实验 实验学时：32学时 适用专业：生物技术；生物工程 课程性质：专业必修 一、实验课程简介 基因工程是一门实践性和技术性都很强的课程4 大块操作技术，包含了从载体和目的基因的制备、连接、转化、筛选、诱导表达到表达产物的鉴定为止的基因工程技术中最基本的实验技术。整套实验设计注重体现基因操作的完整性，因此各个实验之间具有很强的连贯性，前一个实验的结果往往就是下一个实验的原料。 基因工程实验与生命科学其他课程的实验又大不相同，具有自身明显的特点：第一，实验操作是在分子水平上进行，强调微量精准；第二，实验流程长，步骤多，需要的时间长而集中；第三，仪器设备和试剂昂贵，实验创新性和探索性强 二、课程目的 通过实验课教学加强学生对基因工程基本原理的理解，培养学生从事基因工程科研的基本实验操作技能和科研思维能力以及分析和解决实际问题的能力，激发学生学习和研究兴趣。通过系统的实验训练，培养学生独立实验设计和操作能力、观察问题、分析问题和解决问题的能力，提高学生从事实验设计、综合运用实验技术能力，使学生具备从事基因工程教学和科研的能力。 三、考核方式及成绩评定标准 实验技能操作考核成绩（30-40%）加平时实验综合成绩（60-70%）为实验课程总成绩。 四、实验指导书及主要参考书 分子克隆实验指南[美] J.萨姆布鲁克等. 科学出版社 基因工程实验技术 陈宏 中国农业出版社 现代分子生物学实验原理与技术 陈德富 陈喜文 主编 科学出版社 五、实验项目 实验项目一览表 序号 实验项目名称 实验类型 实验学时 必做/选做 实验一 质粒载体DNA的制备 综合性 6 必做 实验二 目的DNA片段的获得 综合性 6 必做 实验三 DNA的体外重组和重组DNA分子的转化 综合性 6 必做 实验四 重组DNA分子的获得 综合性 4 必做 实验五 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 验证性 5 必做 实验六 表达产物的SDS检测 验证性 5 必做 合计 32 实验类型：演示性、验证性、综合性、设计性、其它 实验一 质粒载体DNA的制备 实验类型：综合性 实验目的： 学习和掌握质粒的少量制备方法、DNA 琼脂糖凝胶电泳观察和限制性内切酶酶切方法 实验内容： 大肠杆菌质粒的小量制备 质粒DNA 提纯和鉴定 限制性内切酶切质粒载体 经琼脂糖凝胶电泳回收载体片段 实验要求： 仪器和试剂准备：微量移液、离心机、恒温、，KAc 、NaOH和HAc等。 实验要求： 仪器和试剂准备：微量移液 实验三 DNA的体外重组和重组DNA分子的转化 实验类型：综合性 实验目的： 学习和掌握体外重组 DNA的基本方法 学习和掌握将重组DNA 导入受体菌的基本方法 学习和掌握初步筛选重组DNA分子的基本方法 实验内容： 制备大肠杆菌的感受态细胞 目的基因片段与表达载体连接 重组载体转化感受态细胞 转化大肠杆菌的培养 实验要求： 主要：微量移液LB培养基（1% Tryptone，0.5% Yeast extract，1% NaCl1.5%Agar）、CaCl2 实验四 重组DNA分子的获得 实验类型：验证性 实验目的： 学习和掌握利用蓝白斑筛选重组DNA分子的原理和方法 学习和掌握利用限制性内切酶酶切鉴定重组DNA分子的原理和方法 实验内容： 转化平板培养16~20h后，观察转化菌落的颜色 挑白色克隆接于合适液体培养基中，培养16~20h，抽提质粒 选用合适的限制性内切酶、在合适的反应体系中酶切质粒取出酶切产物，电泳检测酶切。 主要器材及试剂：水浴锅 实验五 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 实验类型：验证性 实验目的： 学习和掌握诱导重组菌表达外源基因产物的基本原理和方法 实验内容： 重组菌的培养 选用合适的诱导物和诱导条件诱导目的基因在大肠杆菌中的表达 收集培养的大肠杆菌样品 实验要求： 主要器材及试剂：微量移液LB培养基、合适的抗生素和诱导物 实验六 表达产物的SDS检测 实验类型：验证性 实验目的： 学习和掌握利用SDS检测蛋白质表达产物的原理和方法 实验内容： 从大肠杆菌菌体内提取蛋白质 SDS电泳分离蛋白质 凝胶的考马斯亮蓝主要器材及试剂：Acrylamide/Bis（30%）、Ammonium persulfate、TEMED、Tris-base、Glycine、考马斯亮蓝