chapter4酶的提取与分离纯化分析报告.ppt

垂直板电泳 毛细管电泳 水平板电泳 圆盘电泳 (三) 离子交换色谱 离子交换层析是利用在离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种物质的吸附力不同而使不同物质分离的方法。 离子交换剂分为两部分：一部分是不能移动的多价的高分子基团，构成骨架；另一部分是活性离子，它在树脂中进出发生离子交换。 活性离子是阳离子，能吸附阴离子的称为阳离子交换树脂；相反则称为阴离子交换树脂。 离子交换法 离子交换Flash 四、根据亲和作用建立的纯化方法 由于酶对底物，竞争性抑制剂,辅酶等配体具有较高的亲和力，而其它杂蛋白对这些配体则没有或有很弱的亲和作用，因此，可以根据酶与杂蛋白对配体亲和力的差异，很容易地将酶分离出来。目前已经建立的方法有亲和层析法和亲和电泳法等。 1、亲和层析法： 亲和层析是利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，而使生物分子分离纯化的技术。 酶与底物,酶与竞争性抑制剂,酶与辅助因子,抗原与抗体，酶RNA与互补的RNA分子或片段,RNA与互补的DNA分子或片段等之间，都是具有专一而又可逆亲和力的生物分子对。故此,亲和层析在酶的分离纯化中有重要应用. 亲和层析的四个要素 载体 配体 臂 待分离组分 亲和吸附 洗涤洗脱 再 生 杂蛋白 目的酶 图. 亲和分离原理示意图 亲和层析 亲和层析过程： 1、 固定配基