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第十三章 BCL-2家族成员 (2)Caspase非依赖性的细胞凋亡 线粒体发挥关键作用： ① 凋亡诱导因子（AIF):位于线粒体外膜，凋亡时转移到细胞质内，进而进入细胞核，引起核内DNA凝集并断裂成50bp的片段。 ②限制性内切核酸酶G（Endo G）：Mg2+依赖性核酸酶，在线粒体中负责DNA的复制和修复。凋亡时，从线粒体释放进入细胞核，对核DNA进行切割，产生以核小体为单位的DNA片段。 (3)细胞凋亡的调控 ① Caspase抑制因子（IAP):直接与Caspase活性分子结合，阻抑其对底物的切割，包括c-IAP家族，c-FLIP，BAR，ACR，都含有由70个氨基酸残基组成的BIR结构域，是抑制凋亡必需的。 ②内源性凋亡激活因子：Smac/DIABLO和Omi/HtrA2，含有IAP结合结合基序（IBMs），能够与IAP结合并释放出被IAP封闭的Caspase 。 细胞坏死与细胞凋亡 （二）细胞坏死(necrosis) 当细胞凋亡不能正常发生而细胞必须死亡噬，坏死作为凋亡的替补形式。 坏死细胞 凋亡细胞 （三）细胞自噬(autophagy) 1、寿命较短的蛋白质通过泛素－蛋白酶体系统降解；而寿命较长的细胞结构及蛋白质则通过细胞自噬途径，由溶酶体降解。 2、细胞自噬的特征是细胞中出现大的双层膜包裹的自噬泡。 3、生理状态下，细胞自噬种族要发生在个体遭遇营养危机时、胚胎发育和变态发育期间。 4、当细胞凋亡所需的关键因子被抑制时，细胞发生自噬。 （一）植物细胞的程序性死亡 （二）酵母细胞的程序性死亡 二、植物细胞与酵母细胞的程序性死亡 胞外信号分子诱导的细胞凋亡途径 凋亡信号通路 当细胞接受凋亡信号分子(Fas, TNF等)后，凋亡细胞表面信号分子受体相互聚集并与细胞内的衔接蛋白(Adaptor protein)结合，这些衔接蛋白又募集Procaspases聚集在受体部位，Procaspase相互活化并产生级联反应，使细胞凋亡。 下游Caspases活化后，作用底物： 裂解核纤层蛋白，导致细胞核形成凋亡小体； 裂解DNase结合蛋白，使DNase释放，降解DNA形成DNA Ladder; 裂解参与细胞连接或附着的骨架和其他蛋白，使凋亡细胞皱缩、脱落，便于细胞吞噬； 导致膜脂PS重排，便于吞噬细胞识别并吞噬。 13.2.2细胞凋亡的形态学和生物化学特征 1、细胞凋亡与坏死(necrosis) 主要区别：细胞凋亡时质膜反折，包裹断裂的染色质片段或细胞器，然后逐渐分离，形成众多凋亡小体（apoptotic bodies），凋亡小体为邻近细胞吞噬。整个过程中质膜整合性好，细胞内容物不会逸散到胞外环境中，因而不引发炎症反应。相反，细胞坏死时，细胞质膜发生渗漏，细胞内容物包括膨大和破碎的细胞器以及染色质片段释放到胞外，导致炎症反应。 细胞坏死与程序性细胞死亡比较 坏死细胞 凋亡细胞 a 正常T细胞杂交瘤细胞 b 凋亡细胞(扫描电镜) c 凋亡细胞(透射电镜) Bcl-2、线粒体与细胞凋亡：当Caspase8活化后，它一方面作用于Procaspase3，另一方面使Bad裂解成2个片段，其中含BH3结构域的C-端片段被运送到线粒体，与Bcl-2/Bax的BH3结构域形成复合物，导致细胞色素C释放。CytC与胞质中Ced4同源物Apaf-1(凋亡蛋白酶活化因子apoptosis protease activating factor)结合并活化Apaf-1，活化的Apaf-1再活化Procaspase9，最后引起细胞凋亡。 哺乳动物细胞中发现的Apaf2即是CytC。 3、P53与细胞凋亡 P53是肿瘤抑制基因，人类肿瘤有50%以上是由P53基因的缺失造成的。将P53重新导入转化细胞，可产生两种结果：生长阻遏或细胞凋亡。 P53通过调节Bcl-2和Bax的表达来影响细胞凋亡。 * * 细胞衰老与程序性细胞死亡 一、细胞衰老的概念与特征 第一节 细胞衰老(cellular aging) （一）概念：一般指复制衰老，即体外培养的正常细胞经过有限次数的分裂后，停止分裂，细胞形态和生理代谢活动发生显著改变的现象。 1、1881年，魏斯曼指出细胞分裂能力是有限的。 2、Carrel认为细胞永生不死。 3、Hayflick界限 （1）实验证据：老男和少女细胞共同培养，显示细胞内部决定衰老。 （2）概念：细胞、至少是培养的细胞，不是不死的而是有一定寿命的。它们的增殖能力不是无限的，而是有一定界限的。这就是有名的Hayflick界限。 体外培养细胞增殖与个体寿命的关系 物种 成纤维细胞传代数 个体最长寿命（年） 龟 90-125