生物制品学第3章部分重点.doc

第三章 生物制品的制备 原料的选择原则：①有效成分含量高，新鲜；②原料来源丰富，产地较近；③原料中杂质含量少；④原料成本低等。 原料的选择注意事项：①植物原料生长的季节性；②微生物原料的对数期；③动物原料的年龄与性别。 原料的预处理与保存： ①动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。 ②植物原料：要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理； ③微生物原料：要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。 原料的保存方法主要有：①冷冻法②有机溶剂脱水法③防腐剂保鲜 常用的破碎方法： ①磨切法②压力法③反复冻融法④超声波振荡破碎法⑤自溶法或酶解法 提取注意事项：①选择提取试剂。②考虑提取溶剂的用量及提取次数、提取时间。③注意提取的温度、pH、变性剂等因素。 分离纯化技术应满足的要求： ① 技术条件要温和，能保持目的产物的生物活性；② 选择性要好，能从复杂的混合物中有效地将目的产物分离出来，达到较高纯化倍数；③ 收率要高；④ 两个技术之间要能直接衔接，不需要对物料加以处理或调整；⑤ 分离纯化过程要快，能够满足高生产率的需求。 分离纯化主要依赖色谱分离方法。色谱技术是下游精制阶段的常用手段，该法优点是具有多种多样的分离机制，设备简单，便于自动化控制和分离过程中无发热等有害效应。 蛋白质类制品的分离纯化方法： (1)沉淀法：原理是使蛋白质胶体颗粒破坏，从而沉淀蛋白质。常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、与靶物质结合沉淀法（如抗体—抗原）等。 (2)按分子大小分离的方法：有超滤法和透折法（即膜分离方法）、凝胶层析法、超速离心法等。其中膜分离法可用于生物大分子物质的浓缩、分级和脱盐。 (3)按分子所带电荷进行分离的方法：离子交换柱层析法、电泳法、等电聚焦法等。 (4)亲和层析法 核酸类药物生产方法：主要有提取法和发酵法。 糖类制品的分离纯化方法： （1）提取方法：①非降解法适用于从含一种粘多糖的动物组织中提取粘多糖，提取采用的溶剂是水或盐溶液。②降解法（degradation）适用于从组织中提取结合比较牢固的粘多糖。 （2）分离方法：沉淀法和离子交换层析法。 脂类制品的分离纯化方法：沉淀法、吸附层析法、离子交换层析法 洗脱一般是采用极性逐渐增大的洗脱液来进行，非极性的先流出，极性的后流出。 氨基酸类制品的分离纯化方法 氨基酸的生产方法：蛋白质水解法（酸水解、碱水解和酶水解）、发酵法 ①用盐酸水解为常用方法，其优点是水解迅速、完全，产物全部是L—型氨基酸，缺点是色氨酸全部被破坏，丝氨酸等部分被破坏。 ②碱水解法易产生消旋作用，较少应用。 ③酶水解法水解不够完全。 氨基酸的分离方法：有沉淀法、吸附法和离子交换法 人血浆白蛋白制剂的制备 白蛋白又称清蛋白，白蛋白是血浆蛋白中含量最高（3.8～4.8%）、分子量最小、分子数最多的一类蛋白质。 从人体中分离的白蛋白有两种：一种是从健康人血浆中分离制得的人血清白蛋白，另一种是从健康产妇胎盘中分离制得的胎盘白蛋白。 白蛋白工艺要点：①络合：对于络合所要求的pH值，可以略高些，这样，白蛋白络合完全，络合物形成一个相当硬的块，倾倒上清液方便，损失少。但不能太高，以防络合血浆中的其它蛋白，影响解离与白蛋白制剂的纯度。若pH值偏低，络合不完全，络合物松软，甚至成汤状，不利于倾去上清液。血浆搅拌用NaHCO3调节pH至8.5-8.7之间，缓慢加入与血浆等体积的2.3%利凡诺溶液，边加边搅拌，充分络合后，静置2~4h，分离上清与络合物沉淀。 加入2.3%利凡诺溶液比加入5%利凡诺溶液的效果好？因为加5%利凡诺溶液常造成灭活时白蛋白部分变性或者分装困难。加入2.3%利凡诺溶液的体积一般不超过血浆体积的一半。这可能是加入利凡诺溶液除去了解离物中过多的Cl-而澄清，或者是加入的利凡诺（过量）使白蛋白与利凡诺的络合物反溶，从而使造成混浊的物质消失，达到澄清的目的。 ②解离：生产中要严格控制溶液的温度。25℃左右室温，络合物形成一个硬块，利于去上清和解离。温度太低，虽然不影响络合，但络合物呈稀糊状，倾倒上清液时常会丢失部分络合物，而且络合物内残存较多的利凡诺的水溶液。解离温度要维持在40℃左右，是解离反应的最适温度。解离液的pH值在1.28~1.45之间，解离效果良好。络合物中加入解离液并搅拌均匀后，将解离后混合溶液pH值控制在6.0左右较理想。以解离后解离混合溶液pH值决定加入解离液的体积。解离后解离混合液的pH值高于6.5时，表明加入的解离液少了，有部分络合物未被解离开；低于5.85，表明加入的解离液多了，解离过度。这两种情况下，解离效果均不佳。在沉淀中加约二分之一血浆体积的灭菌蒸馏水解离所得到的络合