细胞生物学研究方法要点分析.ppt

* 2.3.2　免疫电镜技术： ?免疫铁蛋白技术：铁蛋白提取繁琐，分子量大，不易进 入细胞。 ?免疫酶标技术：反应没有特异性，不能进行感受部位的 点对点对应。 ?免疫胶体金技术：胶体金是直径1-100mμm的金颗粒分 散在水中形成的金溶胶。特异性强，容易识别。分辨 率高。 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分 泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的 定位等 免疫胶体金技术 2.4　细胞内特异核酸的定位与定性 原位杂交技术 放射性同位素标记探针 荧光素标记探针 生物素标记探针 斑马鱼基因的原位杂交 2.5　定量细胞化学分析技术 2.5.1　细胞显微分光光度术（microspectrophotometry） 利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质（如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量。 2.5.2　流式细胞仪（Flow Cytometry） 用于定量测定细胞中DNA、RNA或某一特异蛋白的含量； 测定细胞群体中不同时相细胞的数量； 从细胞群体中分离某些特异染色的细胞； 分离DNA含量不同的中期染色体。 流式分选仪 ＋2000V －2000V 高压偏转板 充以正电的小水滴 充以正电的小水滴 分别收集细胞 激光 排列成单列的细胞通过激光束时，仪器可测定出标记细胞上的荧光强度； 仪器使带有荧光细胞的小水滴充电； 带电水滴通过高压偏转板偏离原来方向，收集细胞； 未含标记的细胞或不含有细胞的水滴不偏转。 水滴充电信号 　　3　细胞培养与细胞工程 3.1　细胞培养 ?动物细胞培养 ? 类型：原代培养细胞（primary culture cell） 继代培养细胞（sub-culture cell） ? 细胞株（cell strain） 正常二倍体，接触抑制 ? 细胞系（cell line） 亚二倍体，接触抑制丧失 ?植物细胞 ?类型： 原生质体培养 （体细胞培养） 单倍体细胞培养（花药培养） ?非细胞体系（cell-free system） 3.1　细胞培养 实验室中常用的几种细胞系 细胞系名称 细胞类型 来源 3T3 成纤维细胞 小鼠 HeLa 宫颈癌上皮细胞 Henrietta Lacks BHK21 成纤维细胞 叙利亚仓鼠 PtKl 上皮细胞 袋鼠 L6 成肌细胞 大鼠 PCI2 嗜铬细胞 大鼠 SP2 浆细胞 小鼠 SP2／0 骨髓瘤浆细胞 小鼠 CHO 卵巢细胞 中国地鼠 Henrietta Lacks, American black ,died of cancer of uterine cervix in 1951 3.2　细胞工程 细胞融合 通过培养和介导，两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合（cell fusion）或细胞杂交。 同核体：相同基因型的细胞融合而成。 异核体：不同基因型的细胞融合而成。 自发融合：同种细胞在培养过程中自发合并的现象。 诱发融合：异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合。 诱导细胞融合的方法：生物方法（仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒 ）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电击和激光）。 细胞融合不仅可用于基础研究而且还有重要的应用价值， 如动植物育种和制取单克隆抗体等。 目前诱导细胞融合的方法有三种： 1. 病毒介导的细胞融合（如仙台病毒） 2. 化学介导的细胞融合（如PEG） 3. 电激介导的细胞融合 The production of hybrid cells. Human cells and mouse cells are fused to produce heterocaryons, which eventually form hybrid cells. These particular hybrid cells are useful for mapping human genes on specific human chromosomes because most of the human chromosomes are quickly lost in a random manner, leaving clones that retain only one or a few. The hybrid cells produced by fusing other types of cells often retain most of t