基因工程概述(苏教版选修3)解读.ppt

(1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有________种DNA片段。 (2)图中②表示HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得________种重组质粒；如果换用BstⅠ与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得________种重组质粒。 (3)目的基因插入质粒后，不能影响质粒的________。 (4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T—DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中________对T—DNA的降解。 (5)已知转基因植物中毒素蛋白只结合某些昆虫肠上皮细胞表面的特异受体，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞________。 (6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的________基因频率的增长速率。 【解析】　(1)图中①的DNA是链状DNA，有HindⅢ的切割位点1个，BamHⅠ的切割位点有2个，且切割位点不重复，两种限制性核酸内切酶有三个切割位点，则完全酶切后形成4个DNA片段，图中可以看出4个片段长短不同。 (2)HindⅢ与BamHⅠ酶切质粒，有两个DNA片段且两端的黏性末端能够和目的基因的黏性末端形成碱基互补配对，所以能够形成含有目的基因的两种重组质粒，但是同时含有目的基因和标记基因的重组质粒只有一种。换用BstⅠ与BamHⅠ切割质粒，由于质粒上只存在BamHⅠ的切割位点，切出的黏性末端是GATC—；BstⅠ与BamHⅠ切 割含有目的基因的外源DNA，由于BstⅠ与BamHⅠ两者切割位点相同，则形成的目的基因片段的黏性末端都是GATC—，所以只能形成一种重组质粒。 (3)构建重组质粒的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在；能够遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。所以，目的基因插入质粒后，不能影响质粒的复制。 (4)T—DNA是农杆菌Ti质粒上的一段能够整合到宿主染色体上的DNA，所以能够降解T—DNA的一定是DNA水解酶。 (5)毒素蛋白只与某些昆虫肠上皮细胞表面的特异性受体结合，才能发挥生物效应。对人无毒，原因是人的肠道上皮细胞上没有与毒素蛋白结合的特异性受体。 (6)毒素蛋白是自然选择的条件，淘汰了无抗性的害虫，保留和选择了抗性个体。 【答案】　(1)4　(2)2　1　 (3)复制　 (4)DNA水解酶 (5)表面无相应的特异性受体　(6)抗性 【纠错笔记】　(1)某种限制性核酸内切酶识别序列的判定：根据切割后的末端，找到切点两侧的回文序列。 (2)限制性核酸内切酶切割质粒时切割位点的判定：依据切割目的基因的限制性核酸内切酶酶切位点，来确定切割质粒的限制性核酸内切酶酶切位点且不能破坏标记基因。 (3)筛选重组细胞的分子方法：分子水平筛选重组细胞，是通过检验核酸和蛋白质来实现的。核酸水平的检测是利用核酸杂交法，工具是核酸探针。蛋白质水平的检测是利用免疫化学检测法，工具是以该基因表达产物的免疫血清作抗体。 知能演练轻巧夺冠 本部分内容讲解结束 按ESC键退出全屏播放 保留一个氨苄青霉素抗性基因；对于目的基因的获取则不能使用酶Ⅰ切割，只有使用酶Ⅱ切割含有目的基因的DNA。由于两种酶的黏性末端相同,所以在DNA连接酶的作用下目的基因和切割的质粒的黏性末端能够形成碱基互补配对。由于质粒只有一个切口,所以目的基因和质粒只能形成一种重组质粒. (3)将目的基因导入大肠杆菌的结果有三种,没有导入任何结构的大肠杆菌，导入插入目的基因的质粒的大肠杆菌和导入没有插入目标基因的质粒的大肠杆菌，由于都含有氨苄青霉素抗性基因，所以能够在含有氨苄青霉素的培养基上生长。 接种微生物后的培养采用倒置培养皿的方式能够防止凝结在皿盖上的水蒸气流到培养基表面污染菌种；有利于菌种利用培养基营养,加快生长速度。 【答案】　(1)①含标记基因　②有一个或多个限制性核酸内切酶切割位点 (2)Ⅰ　DNA连接酶　1 (3)氨苄青霉素　倒置　普通质粒或重组质粒(写一个不给分) 【探规寻律】　(1)当质粒有多个限制性核酸内切酶切割位点时，要分清切割后是否还存在抗性基因等标记基因。 (2)限制性核酸内切酶要切割完整的目的基因，不能破坏目的基因的结构。 (3)不同的限制性核酸内切酶切割要注意黏性末端能否碱基互补配对。 变式训练 2.(2012·南京师大附中高二月考)下图为重组质粒形成示意图。将此重组质粒导入大肠杆菌,然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：a——无抗生素的培养基，b——含四环素的培养基，c——含氨苄青霉素的培养基，d——含四环素和氨苄青霉素的培养基。含重组质粒的大肠杆菌能生长的是(　　) A．a　　　　　　　　　 B．a和c C．a