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B 鉴定翻译后修饰的蛋白质 质谱可通过特征离子监测的方法很快确定磷酸化肽,通过串联质谱确定磷酸化位点; 质谱可与蛋白酶解和糖苷酶酶解结合,寻找糖肽,鉴定糖基化位点; 质谱还参与糖链组成、结构甚至分支情况等的分析。 C 质谱技术的其他作用 质谱可对蛋白质二硫键进行定量和定位,分析蛋白质与蛋白质的相互作用,蛋白质与其他分子的相互作用,以及蛋白质的二级结构等。 6.4蛋白质组数据库的建立和生物信息学 数据库的建立是蛋白质组研究的最重要的一个方面。 蛋白质的数据库包括: 蛋白质序列数据库 质谱数据库 双向电泳图谱数据库 有关蛋白质结构的数据库 6.5 与疾病相关蛋白质研究的基本策略 6.6 蛋白质组研究的目的 建立蛋白质互作网络 为人们了解生物体的各个生长、发育期的各个蛋白质有机组成、协作,更完整的解释各种生命现象奠定基础 促进人类疾病的治疗 本章要点 已知一个DNA片段,如何预测其开放读码框? RACE技术的基本原理是什么? 动物园杂交的原理 基因剔除法 RNAi的作用原理及应用 酵母双列杂交的原理 SAGE 的基本原理及技术路线 什么是蛋白质组、蛋白质组学,以及蛋白质组的研究目的和意义? 人有了知识,就会具备各种分析能力, 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书,广泛阅读, 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍,我们能丰富知识, 培养逻辑思维能力; 通过阅读文学作品,我们能提高文学鉴赏水平, 培养文学情趣; 通过阅读报刊,我们能增长见识,扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操, 给我们巨大的精神力量, 鼓舞我们前进。 * Digest the double stranded cDNA with a sequence-specific restriction enzyme (an anchoring enzyme) that cleaves most transcripts at least once. Nla III is used as an anchoring enzyme since Nla III sites are known to occur approximately every 250 bp. 5. Cleave with Mme I, a Type IIS restriction enzyme (tagging enzyme). Mme I binds to a recognition sequence in the adapter adjacent to the CATG site and cleaves the cDNA ~21 bp downstream from the adapter, releasing a ~60-bp tag with a 2-bp overhang. The tag consists of ~40 bp of adapter sequence and ~21 bp of unique sequence from a single transcript. * 第二讲 基因组序列诠释 5. 转录物组 6. 蛋白质组 问题 细胞周期的不同时期 个体发育不同阶段 不同的器官和组织 不同的外界环境下 各种基因的表达与否、量的差异、表达部位如何 5. 转录物组 5.1 Northern杂交 杂交主要步骤: 提取总RNA(不同组织、不同器官) ↓ 变性电泳 ↓ 制备目的基因探针 转移尼龙膜 (放射性 或 化学标记法) 杂 交 ↓ 扫描或放射自显影 ↓
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