灵芝多糖的深层液体培养技术解析.doc

灵芝多糖的液体培养技术 班级：检验检疫1202 姓名：赵卓 学号：2012033007 1 灵芝液体的深层发酵 4 1.1 生产菌种的选育 4 1.2 培养基的优化 5 1.3 发酵条件的控制 5 2 灵芝多糖的分离提取及结构分析 6 2.1 灵芝多糖的提取纯化 6 2.2 灵芝多糖的分子结构 6 3 灵芝多糖的生物学活性 7 3.1 抗肿瘤活性 7 3.2 免疫调节作用 7 3.3 其它生物学活性 7 灵芝多糖的液体培养技术 摘要：灵芝多糖由于具有抗肿瘤、抗放射、提高免疫力、抗爱滋病毒等多方面的生物活性,引起了人们的广泛重视.一般灵芝多糖的提取主要从灵芝子实体中获得,而人工栽培灵芝子实体生产周期长,产量低.采用液体发酵培养灵芝菌丝体,获得灵芝多糖,具有培养周期短,工艺简单,原料易得,成本低,适于工厂化生产等显著优点.本文对灵芝多糖菌丝体的液体深层发酵作进一步的介绍。 　 关键词：灵芝多糖；菌丝体；发酵；液体培养 Keywords：Ganoderma lucidum Polysaccharide；Mycelium；Fermentation；Submerged Culture 1 灵芝液体的深层发酵 传统上,灵芝是通过野外采集或人工栽培获得,以子实体或抱子粉入药。但灵芝野外采集数量有限,难以适应大生产要求,而人工栽培灵芝周期长、劳动强度大、生产效率低,又受环境、季节等限制,易遭病虫害,产量与质量不稳定。 　从20世纪40年代发展起来的食用菌液体深层发酵技术,与子实体的栽培相比具有明显的优势。液体深层发酵生产工艺简便、周期短、省时省力,而且所得副产物少、产品质量稳定,可以进行大规模的工业化生产。灵芝作为一种重要的食药用真菌,国内外对其液体深层发酵也做了大量研究。 　灵芝的液体深层发酵培养的基本流程是:斜面母种一一级摇瓶种子培养一二级摇瓶种子培养一种子罐培养一发酵罐扩大培养一放罐提取发酵物。影响灵芝等真菌的液体深层发酵生产的最主要因素有3个:生产菌种、培养成分和发酵工艺参数。 1.1 生产菌种的选育 　生产菌种的特性,是液体发酵生产中决定生产周期和生产水平的最重要因素。从自然界分离得到的灵芝菌,依靠自身代谢调控,趋向于平衡生长和繁殖,生长速度慢,不能满足大规模工业化生产的需要。为此,通过人工的灵芝菌种选育,打破灵芝的正常代谢调控,使其快速生长并大量积累目标代谢产物就显得尤为重要。 1.2 培养基的优化 　培养基组成是灵芝发酵控制过程中最基本的因素,对灵芝生物量乃至最终代谢产物的产生可起决定性的作用。培养基中包括碳源、氮源、无机盐和维生素等营养物质,常见的碳源有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、玉米粉等。一般认为单糖(如葡萄糖),可直接被灵芝菌丝体吸收,对菌丝体生长和多糖生成最为有利。常见的氮源有硫酸按、氯化按、硝酸钱、酵母膏、蛋白陈、豆饼粉、鼓皮等。有机氮源比无机氮源更能促进灵芝菌丝体的生长,因而灵芝发酵大都采用有机氮源。 1.3 发酵条件的控制 　确定优良的灵芝菌种和适宜的培养基之后,还需要有最佳的发酵条件,灵芝才能快速生长并积累目标代谢产物。发酵过程中主要控制的参数有培养温度、pH条件、接种量、溶氧及发酵罐搅拌速度等等。一般培养灵芝的适宜pH范围为5.0一6.5,但针对不同产物生产的最适初始pH并不相同。 　接种量对灵芝菌丝的生长有较大影响,一般认为接种量过低时,菌丝生长速度慢,会延长发酵周期;而接种量过高则菌丝老化快,不利于有效物质的积累。 2 灵芝多糖的分离提取及结构分析 2.1 灵芝多糖的提取纯化 　对于食用菌多糖的分离提取,其基本的工艺都差不多,都是利用多糖易溶于热水而不溶于有机溶剂的性质进行提取的。通过热水浸提和乙醇沉淀得到的粗多糖常含有色素、低聚糖和蛋白质等杂质。蛋白质可通过SeVage法、三氯乙酸法、蛋白酶法等来脱除,色素一般用过氧化氢或者活性炭进行脱色,低聚糖和单糖等小分子物质可通过透析、超滤等方法去除。除去色素、低聚糖和蛋白质等杂质后的多糖提取液常常是多糖混合物,可用离子交换色谱法和凝胶色谱法等进一步分离纯化,以得到纯化的不同多糖组分。 2.2 灵芝多糖的分子结构 　灵芝多糖是一种混合物,目前己分离到的有200多种,有水溶性多糖、水不溶性多糖、酸性多糖和碱性多糖等。灵芝多糖以杂多糖为主,主要含有以下单糖:D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、D-甘露糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖、L-岩藻糖等。 　大部分的灵芝多糖以β-(l-3)糖普键为主链, β-(1-6)及β-(1-4)为侧链,其侧链数目大小不一,组成侧链的糖基成分复杂。多糖链由三股单糖链构成, 是一种螺状立体构形物,其立体构形和DNA、RNA相似,螺旋层之间主要以氢键固定,分子量从数百到数十万。 3 灵芝多糖的生物学活性 3.1 抗肿瘤活性