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初步探究miR-519d介导肝细胞癌侵袭转移的机制 12级全科医学 范嘉玲 姚慧 李潇冉 田海波 立项依据与研究内容 [1]。 目前，肝细胞癌的治疗手段主要包括手术切除、肝移植、射频消融和索拉非尼等治疗方法[2]。[3]。肝癌射频消融术的术后总体复发率为66.0%[4]。1980年至2010年，全国累计实行肝移植手术近18113例，累计复发率分别为19.78%、30.46%、35.77%[5]。综上，虽然肝癌治疗已得到巨大进步，但肝癌复发仍是肝癌患者术后的主要威胁。 复发率高主要由侵袭转移所导致 HCC切除术后的高复发率，除了HCC病灶多中心发生的因素外，更主要的原因在于HCC极易在早期通过门脉系统发生转移，导致肝内肿瘤播散，而且因肝内转移而复发的HCC比多中心发生的HCC预后差。因HCC肝内播散早及恶性程度高的特点，患者往往在尚未出现远处转移时即告不治。因此加强对HCC的侵袭和转移机制的研究则显得尤为重要[6]。 HCC侵袭转移机制的研究现状 肝细胞癌侵袭转移的分子改变多种多样，包括基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)、钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、整合素(Integrin)、CD24、CD44、丝氨酸蛋白酶、肿瘤血管生成因子等，但其中起主要作用的是MMPs和E-cad[7]。 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶是一组含锌离子的依赖性内切酶，现已发现24种。其中与肝癌侵袭转移关系最为密切的有MMP-2、MMP-9等。MMPs主要的功能体现在两个方面，一是MMPs几乎能够降解除多糖以外的全部ECM, 其二是可以使别的MMPs激活，形成瀑布效应[8]。研究表明，MMPs表达增多会导致肿瘤的转移，其机制是MMPs通过降解ECM,破坏肿瘤细胞周围的物理屏障，导致肿瘤细胞脱落；从而使肿瘤向周围组织浸润并侵入血管、淋巴管；它还可以促进肿瘤血管的生成，并促进上皮间质转化[9-12]。 现已有研究证明磷酸肌酸转运蛋白3(PITPNM3)、上皮形成素(Epimorphin)、葡萄糖调节蛋白(GRP)均可以调控黏着斑激酶()，FAK可再通过MMP-2和MMP-9发挥促肝癌细胞转移的作用[13-16]。[17]。E-cad降低后细胞骨架重构，细胞间原本紧密的链接变得松散，细胞黏附能力下降易于从原发肿瘤部位脱落，增强了细胞的运动能力和侵袭能力[18]。 钙黏蛋白是上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)中最为重要的上皮标记物，MMPs可以降解细胞表面的E-cad，促进EMT[18]。EMT是指上皮细胞失去细胞极性、丢失细胞间紧密连接和黏附连接，获得了浸润性和游走能力，变成了具有间质细胞功能和特性的细胞。主要特征包括：①细胞黏附相关分子E-cadherin表达降低，导致细胞黏附减弱，细胞分散；②细胞骨架重排，由角蛋白骨架变成波形蛋白骨架；③上皮细胞由原来排列紧密的圆形或方形细胞变成排列松散的梭形细胞形态[19]；④波形蛋白(vimentin)、纤连蛋白(fibronectin)及其他间质标记蛋白表达上调。 近年来已有相当多的证据表明，EMT是肝癌侵袭、转移的关键[21]。比如：应激活化蛋白激酶相互作用蛋白1(SIN1)、转录因子FOXC1可通过促进EMT现象导致肝癌细胞侵袭转移[22, 23]。sv-cyst通过增加E-cadherin，降低Twist来抑制EMT现象从而抑制MHCC97H的转移[24]。 这些分子并不是相互独立的，而是相互联系的。比如分泌型簇蛋白(sCLU)和转录因子snail[25, 26]。这种调控方式与下文中我们猜想的mir-519d参与肝癌细胞转移的机制相类似。 [27-30]。其中PTEN是抑癌基因；P21基因的表达产物通过抑制周期素、周期素依赖激酶复合物活性，来协调细胞周期、DNA复制与修复之间的关系；Akt，亦被称为蛋白激酶B(PKB)，是在细胞凋亡、增殖转录及迁移等多种过程中起到重要作用的一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶;基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinase ,TIMPs)[31]。 已有研究表明，mir-519d在多种肿瘤细胞中表达异常，并参与肿瘤的增殖、侵袭、迁移和凋亡等过程[32, 33]。如戴劲等证实mir-519d能靶向结合OCT4 3UTR序列，通过下调OCT4的表达来抑制膀胱癌细胞系5637的增殖[34]。 而且目前已有报道mir-217、mir-198、mir-590-5p、mir-96、mir-139、mir-214等20余种microRNA对肝细胞癌侵袭转移起促进或抑制作用。而关于mir-519d在肝癌细胞侵袭转移中的作用机制还