原癌基因Mdm与G蛋白偶联受体关键调控蛋白βarrestins的新对话机制研究解析.doc

论文编号：130207101008 博士学位论文 原癌基因Mdm2与G蛋白偶联受体关键调控蛋白β-arrestins的新对话机制研究 姓 名：殷晨磊 学 号：0840160002 所在院系：生命科学与技术学院 学科门类：理学 学科专业：生物化学分子生物学 指导教师：裴钢 二〇一三年六月 A dissertation submitted to Tongji University in conformity with the requirements for the degree of Doctor of PhilosophyCandidate: Yin, Chenlei Student Number: 0840160002 School/Department: School of life Sciences and Technology Discipline: Doctor of Science Major: Biochemistry and Molecular Biology Supervisor: Pei, Gang June, 2013 原癌基因Mdm2与G蛋白偶联受体关键调控蛋白β-arrestin的新对话机制研究 殷晨磊 同济大学  同济大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 年 月 日摘要 G蛋白偶联受体G protein-coupled receptors，GPCRs，又称为7次跨膜受体 (seven-transmembrane receptors)，是细胞表面最大的受体蛋白质超家族，迄今为止在人类基因组中已至少发现900多个GPCRs的编码基因。感受细胞外的信号刺激诸如气味、光线、激素、细胞因子和神经递质并其跨膜传递到细胞内，激活并启动下游信号通路，从而广泛地参与细胞的增殖、分化、迁移和凋亡等各类生理活动的调控。β-arrestinsβ-arrestin1和β-arrestin2是GPCRs信号转导通路中极为重要的调控蛋白，除了在介导经典的受体脱敏和转运中的作用外，β-arrestins还能作为一个支架和接头蛋白起始独立于G蛋白的信号转导通路，其中β-arrestins的磷酸化和泛素化等翻译后修饰与其功能密切相关。在静息状态下，β-arrestin1在胞浆和胞核中均有分布，而β-arrestin2主要分布在胞浆中。目前β-arrestins亚细胞定位的调控机制以及β-arrestins亚细胞定位对其行使正常功能重要意义仍不清楚。，β-arrestins的亚细胞定位和功能受到Mdm2 E3泛素连接酶活性的调控。无论通过表达Mdm2环指结构域突变体还是加入药物处理来抑制Mdm2 E3泛素连接酶的活性都能增强β-arrestins和Mdm2相互结合的能力，从而导致β-arrestins与Mdm2形成稳定的复合物并异常共定位于细胞核内。进一步的研究，(-arrestin1 N端第10、11位和(-arrestin2 N端第11、12位的赖氨酸是其Mdm2相互作用的关键位点，(-arrestins在该位点的突变能够阻断它与酶活缺失突变体Mdm2H457S的相互结合以及在细胞核内的共定位。最后我们发现，Mdm2 E3泛素连接酶活性缺失导致的(-arrestins异常入核干扰了(-arrestins在胞浆中介导的受体内吞和ERK激活的功能。我们的研究揭示了Mdm2与(-arrestins的新对话机制：Mdm2 E3泛素连接酶的活性能够调控(-arrestins和Mdm2相互结合的能力，(-arrestins异常地定位在细胞核中，进而干扰(-arrestins行使正常生物学功能。 关键词：β-arrestin1，(-arrestin2，亚细胞定位Mdm2，ABSTRACT G protein-coupled receptors (GPCRs), also known as seven-transmembrane receptors, constitute the largest family of cell surface molecules involved in signal