黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质与功能基团研究.pdf

◆ ’’ IIIIJ l FI]1IIr III]11 IIl Y1881488 目 录 摘要兽…………………………………………………………………………………………………………………………．I Abstract………………………………………………………………………………………………………………………．1I 第一部分文献综述…………………………………………………………………………。l 1．1蔗糖酶概述…………………………………………………………………………………．1 1．2蔗糖酶的分布………………………………………………………………………………l l-3蔗糖酶的分离纯化…………………………………………………………………………3 1．4蔗糖酶的应用………………………………………………………………………………5 第二部分引言………………………………………………………………………………．．9 2．1研究的目的和意义…………………………………………………………………………9 2．2研究的主要实验内容………………………………………………………………………9 2．3研究的技术路线……………………………………………………………………………9 第三部分蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究……………………………………………11 3．1材料与试剂………………………………………………………………………………．11 3．2实验方法…………………………………………………………………………………．13 3．3结果……………………………………………………………………………………………………………………．16 第四部分蔗糖酶功能基团的研究…………………………………………………………25 4．1材料与方法………………………………………………………………………………一25 4．2实验结果与分析…………………………………………………………………………．．26 第五部分讨论………………………………………………………………………………33 5．1黑曲霉菌株的活化与筛选………………………………………………………………．33 5．2黑曲霉蔗糖酶的分离纯化………………………………………………………………．33 5．3蔗糖酶的酶学性质………………………………………………………………………。33 5．4蔗糖酶的抑制剂研究……………………………………………………………………．34 5．5功能基团的研究…………………………………………………………………………．34 5．6结语……………………………………………………………………………………………………………………．35 参考文献………………………………………………………………………………………．37 致谢……………………………………………………………………………………………．43 一 ◆ 摘要 黑曲霉TH．2蔗糖酶的分离纯化及部分性质 与功能基团研究 生物化学与分子生物学专业研究生黄洁 指导教师唐云明教授 摘 要 蔗糖酶(EC 水解，生成葡萄糖和果糖。它广泛存在于自然界的动物、植物和微生物中，是生物体中一类 重要的水解酶类。研究表明，微生物来源的蔗糖酶比动物、植物来源地蔗糖酶性质更加稳定， 在工业生产中常以酵母、曲霉和细菌作为主要来源。 本文从实验室保存的黑曲霉菌株中筛选出蔗糖酶高产菌，并以它作为出发菌株进行发酵 培养，分离纯化出蔗糖酶，并对其部分酶学性质进行了研究，结果如下： 从实验室保存的14株黑曲霉菌株中筛选出一株蔗糖酶高产菌株黑曲霉TH．2。黑曲霉TH．2 回收率为37．7％，提纯倍数为20．3倍。 测得该酶分子量为129kD，亚基分子量约为63．75kD，为双亚基酶。该酶最适温度为65 ℃，最适pH为4．4，在pH3～5范围内较稳定，米氏常数ton值为23．1mmol