Pseudomonassp.101甲酸脱氢酶基因的合成、表达及其定点饱和突变.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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Pseudomonassp.101甲酸脱氢酶基因的合成、表达及其定点饱和突变.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2013 5 Pseudomonas sp. 101 甲酸脱氢酶基因的合成、表达及定点饱和突变 1 2 1 1 1 李天明朱灵桓刘天佳戴宝新冯惠勇（1. 河北科技大学生物科学与工程学院，石家庄 050018 ；2. 大连工业大学生物工程学院，大连 116034）摘要 : 甲酸脱氢酶（FDH ）是氧化还原酶辅酶NAD+ 和NADH 再生循环体系中的关键酶，具有重要的应用价值和产业化应用前景。通过采用重叠延伸PCR 技术，人工合成编码FDH 的基因，构建原核表达载体pET30a-fdh ，以 BL2 1 （DE3 ） fdh E.coli 为表达宿主，获得了能可溶性表达的甲酸脱氢酶的重组菌；经16 ℃ IPTG 诱导表达，重组酶的比活力为8.7 U/mgPro ；为了提高FDH 的稳定性，采用融合PCR 方法对基因进行了定点饱和突变，经筛选，获得了酶活未变但稳定性有所提高的突变酶 fdh Cys146AlaCys354Ala ，其稳定性比野生酶提高了2.5 倍。关键词 : 甲酸脱氢酶基因合成原核表达饱和突变， Synthesis Expression and Directed Evolution of the Formate Dehydrogenase Gene from Pseudomonas sp. 101 by Saturation Mutagenesis 1 2 1 1 1 Li Tianming Zhu Linghuan Liu Tianjia Dai Baoxin Feng Huiyong （1. ，， 0500 18 ；2. College of Biological Science and Engineering Hebei University of Science and Technology Shijiazhuang