抗镰刀菌单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达条件研析.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 9 :238-243 抗镰刀菌单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达条件的研究 1，2，3 2，4 2，4 2，3 2，3 胡祖权   李和平   吴平   廖玉才   张静柏 （1. 贵州医科大学生物与工程学院，贵阳 550004 ；2. 华中农业大学麦类作物分子生物技术实验室，武汉 430070 ；3. 华中农业大学植物科学 技术学院，武汉 430070 ；4. 华中农业大学生命科学技术学院，武汉 430070） 摘 要 ： 通过优化诱导表达条件，实现抗镰刀菌单链抗体在大肠杆菌周质中高效可溶性表达。将抗镰刀菌单链抗体FvSG7 转化到大肠杆菌XL1-Blue 中，确定诱导表达培养基，诱导温度、诱导剂IPTG 的浓度和诱导时间条件下培养重组大肠杆菌，通过 Western 杂交和ELISA 检测分析单链抗体的可溶性表达情况以及抗体的活性。重组大肠杆菌培养至OD600nm 为0.5 时加入终浓度为0.1 mmol/L IPTG，25℃诱导表达2 h 可获得最大量的可溶性单链抗体。通过对诱导温度、IPTG 浓度和诱导时间等表达条件的优化，可 以显著提高FvSG7 抗体在大肠杆菌XL1-Blue 周质中的表达量。 关键词 ： 单链抗体 ；可溶性表达 ；大肠杆菌；优化 DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.09.034 A Study on the Optimization of Condition for Soluble Expression of - Fusarium specific scFv Antibody in Escherichia coli Hu Zuquan1，2，3 Li Heping2，4 Wu Ping2，4 Liao Yucai2，3 Zhang Jingbo2，3 （1. College of Biology and Engineering ，Guizhou Medical University ，Guiyang 550004 ；2. Molecular Biotechnology Laboratory of Triticeae Crops ，Huazhong Agricultural University ，Wuhan 430070 ；3. College of Life Science and Technology ，Huazhong Agricultural University ， Wuhan 430070 ；4. College of Plant Science and Technology ，Huazhong Agricultural University ，Wuhan 430070 ） Abstract: The objectives of the work is to optimize the conditions for inducing expression, and obtain the soluble and high-yield expression of a Fusarium-specific single-chain variable fragment（scFv）antibody in the periplasmic space of Escherichia coli XL1-Blue. The recombinant plasmid containing a Fusarium-specific scFv