卵形鲳鲹耐低温候选基因△6FAD全长cDNA序列的克隆及表达分析.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 7 :115-123 卵形鲳鲹耐低温候选基因△6FAD 全长 cDNA 序列的 克隆与表达分析 1 1，2，3 1，2，3 1，2，3 1 1 韩洪波  王忠良   陈刚   汤保贵   张健东  黄建盛    1 1 1 周晖  施纲  潘传豪 （1. 广东海洋大学水产学院，湛江 524088 ；2. 广东省普通高校 南海水产经济动物增养殖重点实验室，湛江 524088 ；3. 广东省水产经济动 物病原生物学及流行病学重点实验室，湛江 524088） 摘 要 ： 采用cDNA 末端快速扩增 （Rapid amplification of cDNA ends，RACE）技术克隆了卵形鲳 △ 6 脂肪酸去饱和酶 鲹 （△ 6FAD）的cDNA 全长序列，并对其基因和蛋白序列结构特征进行了生物信息学分析，同时采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术分析了该基因在不同温度条件下的表达差异及低温下的时序表达模式。结果显示，卵形鲳 △ 6FAD 基因cDNA 序列全 鲹 长1 908 bp，其中开放阅读框为1 329 bp，3非编码区431 bp，5非编码区135 bp，共编码442 个氨基酸 ；其编码蛋白属于疏水性 蛋白，无信号肽特征，含有大量蛋白质二级结构和该家族典型的组氨酸富集区及细胞色素b5 结构域。系统进化分析表明，卵形鲳 鲹△ 6FAD 基因与尖吻鲈、军曹鱼的△ 6FAD 基因在进化关系上最为接近，其次是大菱鲆、蓝鳍金枪鱼和点带石斑鱼，但与斑马鱼、 小鼠和人△ 6FAD 基因进化关系较远。实时荧光定量PCR 结果表明，该基因的表达与环境温度和胁迫时间存在明显相关性，其表 达水平在降温过程中随温度降低而先缓慢下降后又迅速升高，在不同的低温环境下表现出不同的时序表达模式 ：13℃时，随时间 延长该基因的表达量呈现先降低后又升高至原来水平的变化趋势，16℃和19℃时则表现出一种随时间延长逐渐降低的反馈式调节 方式。 关键词 ： 卵形鲳 ；△ 6 脂肪酸去饱和酶 ；cDNA 克隆 ；低温胁迫 鲹 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.07.017 - Cloning and Expression Analysis of Full length cDNA Sequence of a Low Temperature Resistant Candidate Gene △6FAD in Trachinotus ovatus 1 1