肋软骨组织细胞变化和腐败尸体死亡时间关系研析.pdfVIP

中山大学硕十论文肋软骨组织细胞变化与腐败尸体死亡时问关系的研究 中文摘要 肋软骨组织细胞变化与腐败尸体死亡时间关系的研究 专 业： 法医学 硕士研究生： 邢浩伟 导 师： 陈玉川教授 中文摘要 死亡时间(postmorteminterval，PMI)又称死后时间间隔，指发现、检查尸 体时距死亡发生时的时间问隔。死亡时问推断一直是困扰国内外法医病理学家的 重要问题之一。在刑事案件侦查中，准确推断死亡时间对于犯罪现场重建、区分 自杀与他杀、缩小侦查范围等有着举足轻重的作用。同时，随着社会法制化的逐 步完善，它对于一些保险理赔、医疗纠纷等民事案件也具有一定的现实意义。 以往学者对死后72小时内早期死亡时问推断进行了大量研究，并已建立了 一些行之有效的方法。然而，实际工作中有时会碰到腐败尸体死亡时问推断的棘 手问题。近年来，一些学者根据组织DNA、mRNA和蛋白的降解、尸体化学和 腐败气体气压的变化、嗜尸性昆虫及腐败细菌的活动等规律对腐败尸体死亡时间 推断做了有益的尝试，但受检材腐败和技术等限制而未能有效应用于实践，目前 仍主要是根据办案人员的经验进行推断。因此，建立一种简便有效的用于腐败尸 体死亡时间推断的方法，在刑事科学技术中具有重要的理论和应用价值。 DNA是生物体组织细胞内重要的遗传物质，同一物种组织细胞核DNA平均 含量基本一致。研究表明：机体在死后一段时间内，其组织细胞核DNA发生规 律性降解，检测其含量变化对死亡时间推断具有重要意义。肋软骨组织内无血管、 淋巴管等细菌繁殖所需的营养成分，软骨基质由大量II型胶原等成分交织成牢固 的三维网状结构，软骨细胞位于软骨陷窝内、受外界环境条件影响较小，故死后 软骨细胞降解较为缓慢，且其取材方便，有望用于腐败尸体死亡时间推断。 本课题基于腐败发生的本质，选取易获取且腐败较缓慢的肋软骨作为研究对 象，借助常规HE、Feulgen、AgNOR等组织形态学方法和PCR相对半定量技术， 研究下列问题： 中山大学顾士论文肋软骨纽织细胞变化与腐败尸体死r：时间关系的研究 中文摘要 (I)观察不同腐败时期肋软骨细胞核DNA含量变化，推断其与腐败尸体 死亡时间之间的关系； (2)观察不同腐败时期肋软骨组织形态学变化、肋间肌内腐败细菌变化规 律，探讨其在腐败尸体死亡时间推断中的参考价值。 材料和方法 30只健康雌性SD大鼠(购自中山大学动物实验中心)，体重190～2009， 随机分为10组，每组3只大鼠，断颈处死后，取其中一组作为对照组并即刻解 剖。其余9组置于21±l℃恒温光照培养箱内，分别于死后ld、3d、5d、1w、 2w、3w、4w、5w、6w时间点选取一组大鼠，观察记录其尸体腐败现象，并于 相对同定部位提取双侧肋软骨及肋间肌(6w组肋软骨及肋问肌完全消失)。从以 下两方面进行研究： 1．组织形态学： 标本置于10％中性福尔马林溶液中固定48h，流水冲洗后常规脱水、包埋、 切片，分别行HE和改良Feulgen染色显示细胞及胞核形态、AgNOR染色显示 腐败细菌，并以目标面积(A)、积分灰度(IG)、平均灰度(AG)为分析指标， 对肋软骨细胞核Feulgen染色结果进行计算机图像分析。 2．分子生物学； 部分肋软骨取材后立即置于．70C超低温冰箱冻存，酚．氯仿法提取其DNA， 软件，以平均灰度(AG)为分析指标对肋软骨细胞DNA进行相对半定量分析。 结 果 1．HE染色结果： 软骨组织于死后1d无明显变化；死后3d，软骨细胞开始皱缩，细胞核固缩 II 中山大学硕七论文肋软骨组织细咆变化与腐败尸体死亡时问关系的研究 中文摘要 浓染；死后5d，软骨细胞胞质呈弱嗜酸性染色，核仁消失；死后1w，软骨细胞 肿胀、呈不规则网状，胞质嗜酸性增强，部分细胞核溶解；死后2w，软骨膜完 全消失，软骨细胞皱缩、结构不清、里嗜酸性变，偶见残存细