P19细胞过表达外源Necdin对其细胞增殖的影响.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第10期 P19 细胞过表达外源 Necdin 对其细胞增殖的影响 1 2 2 惠焕动  刘勇  刘少君 （1. 中南大学，长沙 410083 ；2. 军事医学科学院基础医学研究所，北京 100850） 摘 要 ： 构建PcDNA3.1/necdin 真核表达载体并制备稳定过表达Necdin 的P 19 细胞克隆，检测稳定过表达Necdin 对P 19 细 胞增殖的影响。从正常培养P 19 细胞提取RNA 反转录成cDNA ，以此作为PCR 模板扩增得到necdin 目的基因，插入PcDNA3.1 载体的 R Ⅰ和 Ⅰ位点 ；脂质体法将构建的真核表达载体PcDNA3.1/necdin 转染P 19 细胞，G4 18 筛选后挑取细胞单克隆， Eco Xho Western 印迹鉴定细胞单克隆中Necdin 的表达水平。CCK-8 法检测过表达necdin 对P 19 细胞增殖的影响。成功构建PcDNA3.1/ necdin 真核表达载体并获得稳定高表达Necdin 的P 19 细胞克隆，检测发现P 19 细胞过表达Necdin 后其细胞增殖未发生明显变化。 P 19 细胞稳定过表达外源Necdin 对其细胞增殖无明显影响。 关键词 ： Necdin 载体构建 细胞转染 P 19 细胞 过表达 细胞增殖 Effect of Overexpressed Exogenous Necdin on the Cell Proliferation of P19 Embryonal Carcinoma Cells 1 2 2 Hui Huandong Liu Yong Liu Shaojun （1.Central South University ，Changsha 4 10083 ；2. Dep artment of Neurobiology ，Institute of Basic Medical Sciences ， Academy of Military Medical Science ，Beij ing 100850 ） Abstract:  It was to construct eukaryotic express vector PcDNA3.1/necdin and obtain the monoclonal P 19 cell highly expressing necdin, and then detect the effect of overexpressed necdin on the cell proliferation of P 19 cell. Total RNA was extracted from normal P 19 cells. RT-PCR was used to amplify the aimed segments necdin which was then digested with EcoR Ⅰand Xho Ⅰand inserted into a eukaryotic expression plasmid PcDNA3.1 to construct PcDNA3.1/necdin. The constructed vector was transfected