pEGFP-C2LAT-ORF3真核表达载体的构建及在Vero细胞中的表达.pdfVIP

生物技术通报 BIO TE CHN OLOG Y B ULLETIN 2010 11 pEGFP C2 / LAT ORF3 Vero 1 2 薛礼长 杨慧兰 1 2 ( , 510006; , 510010) : 克隆单纯疱疹病毒型( herpes smi plex virus , H SV2)潜伏相关转录体 ( latency associated transcript, AT)第 3 个开放阅读框 ( open read ing fram e 3, ORF3)的 DNA序 , 构建 pEGFPC2/ ATORF3真核表达载体, 并观察其在非洲绿猴肾细 胞 (Vero) 中的表达, 为进一步研究 AT基因及ORF3的生物学功能奠定基础用HSV2 333株感染 Vero细胞, 从Vero细胞培 养液中收集 H SV2并提取 HSV2基因组以H SV2基因组为模板, PCR扩增得到 HSV2 AT ORF3 DAN 片段将 ORF3片 段连接到 pEGFPC2质粒上, 用卡那霉毒筛选阳性克隆, 经菌落 PCR, 双酶切及测序验证 pEGFPC2/ ATORF3真核表达载体 构建成功用 Xfect转染试剂将重组载体转染入 Vero细胞,倒置荧光显微镜观察其在 V ero细胞中的表达双酶切及测序结 果验证 ORF3片段正确插入 pEGFPC2质粒, 荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的 Vero细胞中的表达成功构建 pEGFPC2/ ATORF3真核表达载体, 该重组质粒能在 Vero细胞中成功表达 : 单纯疱疹病毒型 pEGFPC2质粒 AT ORF3 真核表达载体 Vero细胞 Construction and Identification of Eukaryotic Expression P asm id pEGFP C2 / LATORF3 and Its Expression in V ero Ce s Xue izhang1 YangHu ilan2 1 ( School of Biological Science and Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006; 2D epartment of D ermatology, Guangzhou iuhuaqiaoH osp ital, Guangzhou 510010) Abstrac:t The study w as to construct the eukaryotic expression p lasm id contain ing the open reading fram e(ORF) 3 of the herpes smi p lex virus 2(HSV2) latency associated transcript( AT) gene, and detect its expression in Vero cells in order to lay a foundation for further research on the b iological function of AT gene and ORF3. The Vero cellsw ere infectedw ith H SV2 333 strain, and HSV2 ge nom e w as extracted from HSV2 whichw ere collected fro