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生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( )
2015, 31 8 :206-212
薯蓣褪绿坏死花叶病毒 CP 基因的原核表达及
抗血清的制备
张鹏远 任龙辉 王建光 陈壮壮 钟宇 陈穗云
（云南大学生命科学学院，昆明 650091）
摘 要 ： 薯蓣褪绿坏死花叶病毒 （yam chlorotic necrotic mosaic virus，YCNMV）是马铃薯Y 病毒科柘橙病毒属暂定成员。采
用RT-PCR 方法，以Sprimer/M4 简并引物对扩增获得的YCNMV 分离物3端基因组序列为参考序列，根据该序列设计 基因特
CP
+
异引物获得YCNMV CP 基因并插入pET-30a 表达载体中，在BL21（DE3）菌株中诱导表达。获得的融合蛋白经Ni -NTA 柱纯化后
免疫新西兰大白兔，制备抗血清。结果表明，连接在表达载体中的 基因序列及表达的蛋白氨基酸序列与预期的 基因核苷酸
CP CP
和氨基酸序列同源性均为99.65%。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明，获得的融合蛋白大小约为44 kD，与预期蛋白大小相符。制备
的抗血清经Western blotting 和ID-ELISA 检测表明，获得的多克隆抗体效价较高，能可靠、灵敏、特异地与YCNMV 病毒颗粒结合，
可应用到该病毒的检测中。
关键词 ： 薯蓣褪绿坏死花叶病毒 ；外壳蛋白 ；原核表达 ；抗血清
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.08.030
Prokaryotic Expression of CP Gene of Yam Chlorotic Necrotic Mosaic
Virus and Preparation of Its Antiserum
Zhang Pengyuan Ren Longhui Wang Jianguang Chen Zhuangzhuang Zhong Yu Chen Suiyun
（School of Life Science ，Yunnan University ，Kunming 650091 ）
： Yam chlorotic necrotic mosaic virus（YCNMV）is a new tentative species of genus in the family Potyviridae.
Abstract Macluravirus
Referring to the 3-terminal sequence amplified with degenerate primers Sprimer/M4 by RT-PCR, we designed the spe
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