DNA重组技术的基本操作程序.ppt

（3）花粉管通道法： ①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还未 愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含目的基 因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ② 特点:十分简便经济 ③实例：转基因抗虫棉 1、目的基因导入植物细胞的方法 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （3）程序： 含目地基因的表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 （2）受体细胞： 受精卵 3、将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ②常用细胞：大肠杆菌 ③常用方法：Ca2+处理获得感受态细胞 ④过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收DNA 表达载体 与感受态 细胞混合 1.导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2.目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 思考 四、目的基因的检测与鉴定 探针 15N 15N 转基因生 物的DNA 14N 14N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入 了目的基因 基因探针： 放射性同位素等标记的含目的基因DNA分子 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 1、检测——分子水平的检测 变性 方法—— 分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 1、检测——分子水平的检测 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 Bt毒素蛋白 1、检测——分子水平的检测 2、鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未导入目的基因或导入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明导入了抗虫基因并得到表达。 课堂练习 1、有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ D 课堂练习 3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 【拓展深化】　 工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序2中用到。 课堂练习 4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达 C 【拓展深化】　只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对 课堂练习 即时应用(随学随练，轻松夺冠) 5．(2009年高考浙江卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是(　　) A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 D 课堂练习 1. 2 基因工程的 基本操作程序 1、原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端，是RNA聚合酶 识别和结合的部位，有了它才能驱动 基因转录出mRNA，最终获得蛋白质。 终止子：位于基因尾端的一段特殊的DNA 片断，能终止mRNA的转录。 原基核因细结胞构 编码区： 非编码区 能转录为mRNA，编码蛋白质 不能转录为mRNA，不能编码蛋白质 功能