3、微生物限度验证.ppt

38 计数方法的验证-各国药典结果判断标准 USP：各试验菌的回收率均不低于70% 。 EP、BP、JP: 各试验菌的回收率均不低于80% 。 中国药典：各试验菌的回收率（包括供试品组和稀释剂对照组）均不低于70%。 不可以接受的标准（1）： 1、阴性对照： 阴性对照(包括蛋白胨组和空白样品组) 发生污染事件。 菌落鉴别：- 污染菌是测试菌：检验员无菌操作培训。 - 污染菌不是测试菌：偏差调查。 2、阳性对照： 样品组的试验数据与检测限不符。（微生物的回收率过 高或过低）结论：样品组的试验结果无效。 重新开始细菌的恢复试验直至与检测限相符。 不可以接受的标准（2）： 3、样品组： - 三人三次的试验结果应该与检测限相符。 - 第一次的试验结果要能够被第二次和第三次的 试验证实。 - 任何一次与检测限不符的结果都说明试验过程 有缺陷，验证需重新进行。 优化更新步骤： 消除抑菌活性。 稀释样品时，应确认检测限（检验限度）低于或等于标准。 不同的细菌，一个好的结果可以从不同的稀释度中检测出，最高的稀释度将被用于日常的监测中。 平板法优化更新方法： 稀释样品：1/10 1/50 1/100 增加培养基量 延长培养时间 添加抗活性剂 计数方法验证（薄膜过滤法） 样品组： 样品溶液（1/10）10ml 过滤 5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml 蛋白胨对照组： 蛋白胨稀释液 10ml 过滤 （阴性对照） 5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml 菌种组： 5x102 cfu/ml菌悬液 0.1 ml 过滤 （阳性对照） 过滤 空白样品组： 计数A 计数B 计数C 计数D 可以接受的标准 — 薄膜过滤法 1、重现性良好 - 三批不同批次的样品/产品 - 三名不同的微生物检验人员 2、验证数据合理有效（微生物的回收率） - 阴性对照：没有污染事件发生。 - 样品组： A = C ± 30% （ 偏差≤ 30%） 3、样品的处理方法和检验方法与检 验规程相符 薄膜过滤法优化更新方法： 增加冲洗量 增大样品稀释倍数（1/50，1/100） 延长培养时间 添加抗活性剂（冲洗剂里加也可以） 2010年版中国药典（附录109页）： 若没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用， 那么验证试验中微生物回收的失败可看成是因 供试品的抗菌活性引起的，同时表明该供试品 不能被试验菌污染。然而，供试品也可能仅对 试验用菌株具有抑制作用，而对其他菌株没有 抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物 限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果 判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高 稀释级的供试液进行方法验证试验。若验证试 验符合要求，应以该稀释级供试液作为最低稀 释级的供试液进行供试品检验。 2010年版中国药典（附录109页）： 计数方法验证时，若采用上述计数方法总存在 一株或多株试验菌的回收率达不到要求，那么 选择回收情况最接近要求的方法和试验条件进 行供试品的检测。 微生物检验方法验证 （二）控制菌检验方法验证 控制菌检验方法验证菌种选择原则 样品的给药途径和类型决定了采用何种控制菌检查验证。 增菌培养基的确定 增菌培养基的实际用量等同控制菌检查方法验证时的用量。 验证的开始。 控制菌检验方法验证 选定一个方法：CP或USP 设定检测限：不得检出