病毒(类)蛋白载体教案分析.ppt

病毒纳米颗粒（ Viral nanoparticles） --成像与载药纳米材料新载体 报告人：陈天翔 时间：2015.04.03 宁波材料所 主要内容 病毒纳米颗粒简介 病毒纳米颗粒修饰方法 相关实例（文献）分析 病毒纳米颗粒基本概念 Viral nanoparticles (VNPs) 病毒（类）纳米载体，是基于病毒蛋白（衣壳蛋白）自组装形成的纳米颗粒，可作为新型纳米材料的基件或载体，或具有感染力。 Viruslike nanoparticles (VLPs) 是VNPs的基本构成单位，不包括遗传信息，因而不具备感染力。  T4 Bacteriophage Influenza Virus Head Tail sheath DNA Tail fiber RNA Capsid Surface proteins Membrane envelope RNA Capsid proteins Tobacco Mosaic Virus 病毒纳米颗粒材料优势 基因编码--自组装 高度对称--三维蛋白结构 高通量位点--多阶拷贝 结构均匀--单分层 结构特异性 潜在优势 生物相容性与生物可降解性 可修饰性（基因/化学修饰） 对人体无害、不会感染 Journal of Biomedical Engineering 2014.31(3): 718-722. 病毒纳米颗粒分类 病毒按宿主分为：噬菌体、植物类病毒、动物类病毒 二十面体植物病毒 雀麦草斑 纹病毒BMV 病毒按纳米材料结构分： 豇豆花叶病毒CPMV 红三叶草坏死花叶病毒RCNMV 二十面体噬菌体 芙蓉褪环斑病毒HCRSV 豇豆褪绿斑驳病毒CCMV M13丝状噬菌体 Qβ噬菌体 MS2噬菌体 棒状植物病毒 马铃薯X病毒PVX 烟草花叶病毒TMX 病毒纳米颗粒研究过程 病毒纳米颗粒VNPs/VLPs制备 植物提取 细菌、酵母提取 VNPs/VLPs修饰 体内体外评价试验 从植物或者细菌中得到的病毒对人畜不会造成感染和危害， 这些优点使病毒在医学领域有着潜在的应用前景。 实例文献分析 雀麦花叶病毒 吲哚花青绿 人支气管上皮细胞 二十面体植物病毒 (1) 透析解离BMV病毒；(2) 离心丢弃大部分RNA及未解离BMV病毒 (15k RPM, 30 min)，取上清得到衣壳蛋白； (3) 丢弃未分离BMV病毒与RNA(90k RPM, 1 h)，取上清得到衣壳蛋白； (4)透析去除剩余RNA；(5) 丢弃重新自组装的BMV病毒(90k RPM, 1 h)； (6) 取上清收集BMV衣壳蛋白；(7) 加入ICG染料；(8)重新自组装形成BMV病毒结构（不含RNA）并透析24h；(9) 高速离心，弃上清液中的多余ICG (90k RPM,1 h)，取沉淀OVGs； (10) 重悬。 荧光及共聚焦成像：a：不含OVG，b：含OVG（ICG浓度10 ug/mL）及c：含OVG（ICG浓度143 ug/mL） 细胞毒性：a：Control，b：ICG C：含OVG（ICG浓度10 ug/mL） D：含OVG（ICG浓度143 ug/mL） 既可作磁性纳米材料的载体，又具备表皮生长因子受体的靶向功能。 多瘤病毒 多瘤病毒 SV40-VLPs 解离形成 VP1-五聚体。CMNPs 表面包裹形成 VP1-五聚体。 不同粒径的CMNPs 8, 20, 27 nm 分别孵育。bar: 100 nm。 CMNPs 与 VP1-CMNPs 的DSL数据。 Zeta 电势。 T1 与T2成像 MRI。 利用聚乙二醇交联剂交联VP1与EGF。 铁与EGF的含量对比 偶联EGF的VP1材料电泳图谱 雀麦花叶病毒 乙肝病毒 BMV 自组装：纳米材料与 BMV以1:99混合于TNKM bu?er (0.05 M Tris-HCl, 0.05 M NaCl, 0.01 M KCl, 0.005 M MgCl2) 100 μL，蛋白浓度为0.5 mg/mL。并用TNKM溶液透析24 h，完成后用低离子浓度的pH 4.6SAMA bu?er (0.05 M NaOAc, 0.008 M Mg(OAc)2)再次透析，并完成自组装。 HBV自组装： 用1.5 M 胍（guanidine）-HCl bu?er (0.5 M LiCl, 50 mM HEPES, 2 mM DTT, pH7.5) 透析解离HBV病毒，并去除RNA等沉淀物，剩余物用HPLC分离纯化。将分离所得的HBV衣壳蛋白以同样的1：99比例与磁性纳米粒子混合，并在低离子强度的缓冲液中(0.1 M NaCl, 50 mM Tris,pH 7.5)进行透