色谱柱教程详解.ppt

2.分析方法开发 2）中性分析时采用缓冲盐体系 含缓冲液的流动相可改善保留, 分离和色谱峰峰形。 在中等pH下, 离子强度较高, 能有效掩蔽硅羟基的二次作用减少拖尾。 故可以增加缓冲液的溶度来减少拖尾。 缓冲液 pKa pH范围 磷酸盐pK1 2.1 1.1~3.1 柠檬酸盐pK1 3.1 2.1~4.1 甲酸盐 3.8 2.8~ 4.8 柠檬酸盐pK2 4.7 3.7~5.7 乙酸盐 4.8 3.8~5.8 柠檬酸盐pK3 5.4 4.4~6.4 磷酸盐pK2 7.2 6.2~8.2 羟甲基甲胺 8.3 7.3~9.3 氨 9.2 8.2~10.2 硼酸盐 9.2 8.2~10.2 甘氨酸 9.8 8.8~10.8 1-甲基-哌啶 10.3 9.3~11.3 四氢化吡咯 10.5 9.5~11.5 二乙胺 10.5 9.5~11.5 三乙胺 10.7 9.7~11.7 磷酸盐pK3 12.3 11.3~13.3 反相HPLC常用缓冲液 pH 2.5 磷酸 0.1% 三氟乙酸 0.1% 2.分析方法开发 3）分析碱性成分时，可加入TEA来改善峰形 10 mM TEA 4) 竞争酸对酸性组分的峰形的影响 乙酸和三氟乙酸均能作为竞争酸填加至流动相中。 三氟乙酸由于所需浓度较低, 可作为首选。 pH 3 5 mM NaH2PO4 pH 3 5 mM NaH2PO4 1% 乙酸 pH 2.5 0.1% 三氟乙酸 5) 流动相对色谱的影响 改变流动相的配比方式，可增加柱效 刻度混合: Dial-a-Mix A: 水 B: 甲醇, 用泵抽取50% B 体积比混合: Vol/Vol 250 mL水 + 250 mL甲醇, 用泵抽取100%混合液 定容混合: Mix-to-Mark 250 mL甲醇, 用水定容至500 mL, 用泵抽取100%混合液 重量比混合: Premixed (w/w) 200 g甲醇 + 200 g水, 用泵抽取100%混合液 2.分析方法开发 刻度混合: Dial-a-Mix 体积比混合: Vol/Vol 待测物pKa+1.5以外 的流动相pH 可保证方法的稳定性 * Agilent Bonus-RP, 1.嵌入极性基团 2. 使用空间位阻大的硅烷 3.三封端 4.PH范围：2-9 优点：可以在中等PH下分析酸性、碱性 和中性组分，可用于100%全水相， 峰形优异，柱寿命长. 5.不同品牌色谱柱介绍 Agilent Extend-C18, 1.采用独特的双齿键合结构 2. 双封端 3. pH范围:2-11.5 优点：可以在中高PH下分析酸性、碱性 和中性组分，尤其碱性组 峰形优异，柱寿命长。 5.不同品牌色谱柱介绍 Waters 1. XTerra XTerra是一种超越极限的色谱柱 ,其填料是利用先进的无机、有机杂化颗粒技术 由两种高纯单体合成的高纯硅胶填料。 传统硅胶填料有大量裸露的OH 1.大量的-CH3有机硅烷单元 2.-OH硅羟基数量大大减少 3.骨架分布均匀 Surface core Surface core 传统硅胶填料 XTerra 杂化颗粒 5.不同品牌色谱柱介绍 1.极宽的pH范围(1-12) 2.高温稳定性 3.极佳的对称峰形（含有甲基硅烷单元） 4.极快的分离速度和极佳的分离度 5.具有不同的键合相、和多种规格满足各种不同的需求 XTerra 柱的优点： 5.不同品牌色谱柱介绍 XTerra MS 1.采用独特的三点键合结构 2. 适合与MS检测器配合使用 3.封端 4.PH范围：1-12 5.不同品牌色谱柱介绍 XTerra RP 1.嵌入极性基团 2. 适合与紫外、荧光、电化学以及示差折光等多种