基因工程课件分析.ppt

一百四十年前，在捷克一个修道院里沉醉于豌豆杂交实验的Mendel也许根本就没有想到，他提出的遗传因子在半个世纪后被Morgen定义为基因；而且1944年Avery证明了基因的物质基础是DNA；五十年代初Watson和Crick又揭示了DNA的分子结构；七十年代初DNA已可在体外被随意拼接并转回到细菌体内遗传和表达。生命科学的飞速发展孕育了现代分子生物学技术──基因工程的诞生。 从狭义上讲，基因工程是指将一种或多种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿遗传并表达出新的性状。因此，供体、受体和载体称为基因工程的三大要素，其中相对于受体而言，来自供体的基因属于外源基因。 广义的基因工程定义为DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是外源基因重组、克隆和表达的设计与构建（即狭义的基因工程）；而下游技术则涉及到含有重组外源基因的生物细胞（基因工程菌或细胞）的大规模培养以及外源基因表达产物的分离纯化过程。 基因工程过程示意图 限制性内切酶的定义 限制性内切核酸酶的定义：限制性内切核酸酶是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的脱氧核糖核酸酶。 DNA连接酶 DNA连接酶的定义:一种能封闭DNA链上缺口的酶,借助ATP或NAD水解提供的能量,催化DNA链的 5’-PO4与另一DNA链的3’-OH生成磷酸二酯键. 载体 作用：将外源基因送入受体细胞。 条件： 能在宿主细胞内复制并稳定地保存。 具有多个限制酶切点。 具有某些标记基因 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 提取目的基因 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 提取目的基因的方法（一） 直接分离基因——鸟枪法 提取目的基因的方法（二） 人工基因合成法 目的基因与载体结合 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 将目的基因导入受体细胞并扩增 基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。 导入受体细胞常用的方法是借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理。 目的基因可以随着受体细胞进行快速的繁殖，在很短的时间内获得大量的基因。 二、高等植物基因工程 广泛应用于微生物系统的重组DNA技术在高等植物尤其是农作物的品种改良方面也日益显示出其重大的经济意义。将相关的单一基因或小型基因蔟导入植物体内，可培育出具有抗病虫害、抗除草剂和抗环境压力等多种优良遗传品质的农作物。目前大量的农作物转基因品种已经问世，其中包括水稻、玉米、马铃薯、黑麦、红薯、大豆、豌豆、棉花、向日葵、亚麻、甜菜、甘草、番茄、生菜、胡萝卜、卷心菜、黄瓜、芦笋、苜蓿、草莓、木瓜、猕猴桃、越橘、茄子、梨、苹果和葡萄等。不久的将来，人们在超市的货架上还可看到自然界不存在的全新转基因蔬菜和水果。 转基因技术在植物品种改良中的应用 1、控制果实成熟 蔬菜和水果成熟后，其组织呼吸速度和乙烯合成速度普遍加快，并迅速导致果实皱缩和腐烂。控制蔬菜水果细胞中乙烯合成的速度，能有效延长果实的成熟状态及存放期，为其长途运输提供了有利条件，具有重要的经济价值。 植物细胞中的乙烯由S-腺苷甲硫氨酸经氨基环丙烷羧酸合成酶ACC和乙烯合成酶EFE催化裂解而成。九十年代初，科学家们采用反义RNA技术封闭蕃茄细胞中上述两个酶的编码基因的表达，由此构建出的重组蕃茄的乙烯合成量分别仅为野生植物的3%和0.5%，明显增长了蕃茄的保存期。目前，类似的研究以扩展到了草莓、苹果、香蕉、芒果、甜瓜、桃子以及梨等多种水果。 2、抗虫害 昆虫对农作物的危害极大，目前对付昆虫的主要武器仍是化学杀虫剂，它不但严重污染环境，而且还诱使害虫产生相应的抗性。苏云金芽孢杆菌作为天然的微生物杀虫剂在美国已使用了三十年，该细菌能合成一种分子量为125KD的晶体蛋白，对许多昆虫包括棉蚜虫的幼虫具有剧毒作用，但对成虫和脊椎动物无害。实际上苏云金芽孢杆菌产生的只是由1,187个氨基酸残基组成的无活性毒素原蛋白，幼虫接触到毒素原蛋白后，其消化道中的蛋白酶将之水解成68KD的毒性片段，后者与幼虫中肠细胞表面的受体结合，从而干扰细胞的生理过程。然而通过发酵苏云金芽孢杆菌生产这种生物杀虫剂，成本颇高，且