基因重组技术的基本工具分析.pptVIP

DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 相同点 双链 单链 在两DNA片段之间形 成磷酸二酯键 将单个核苷酸加 到已存在的核酸 片段的3’末端的 羟基上，形成磷 酸二酯键 都能形成磷酸二酯键 二者都由蛋白质构成 为什么要有“目的基因的获取”这一步？ 为什么要有“目的基因的获取”这一步？ 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程的产物 一、基因工程的概念 是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组技术和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的生物类型和生物产品，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫DNA重组技术；也叫基因拼接技术。 最早创立基因工程技术的科学家是：美国科学家科恩 DNA重组技术的基本工具 工欲善其事, 必先利其器. 想一想:获得转基因抗虫棉需要做哪些工作呢? 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 实现这一精确的操作过程的工具是什么呢? 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 通过运载体导入 转基因棉花含抗虫基因 转基因棉花产生伴胞晶体 转基因棉花有抗虫特性 二、DNA重组技术的基本工具 二、DNA重组技术的基本工具 “分子手术刀”-- “分子缝合针”-- “分子运输车”-- 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体 1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” （1）来源： 主要是原核生物； （2）种类： （3）特点： （4）结果： 约4000种； 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键（切点）断开。(6个,4、5、8个) 形成两种末端 黏性末端 平末端 这类酶在原核生物中起什么作用? 为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ T 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A EcoRI只能识别GAATTC的核苷酸序列 只从G和A之间切开 ; SmaI只识别CCCGGG的核苷酸序列,只 从C和G之间切开,画出切割后的结果. 几种限制酶识别序列的比较 限制酶所识别的序列有什么特点 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称重复排列 限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称，重复排列的。 分组讨论： 尝试写出这几种识别序列被切开所形成的末端，并观察他们的特点 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 1、种类： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 2、 DNA连接酶——“分子缝合针” 类型 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶 或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 2、作用部位：双链DNA片段之间 磷酸二酯键 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个双链DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 3、载体——“分子运输车” 作为基因工程的载体需要怎样的条件呢？ (2).作为运载体必须具备的条件 1.能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存。 2.具有限制酶切点，以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因，便于进行筛选。 4.必需是安全的，不会对受体细胞有害。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素抗性基因。质粒的存在与否对受体细胞生存没有决定性作用，但复制只能在受体细胞内完成。 质粒是一种裸露的、结构简单、独 立于细菌染色体（即拟核DNA）之外， 并且具有自我复制能力的双链环状 DNA分子。 质粒是基因工程最常用的