选修三基因工程第一轮复习技术方案.ppt

基因工程复习一 将目的基因导入动物细胞 显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中） 导入微生物 将目的基因导入微生物细胞 4检测和鉴定 Ca2＋处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。 筛选含有目的基因的受体细胞目的基因的表达 检测: 是否插入目的基因 是否转录 是否翻译 鉴定: 功能活性鉴定 抗性鉴定 分别提取什么进行检测 DNA 附着在膜上 硝化纤维素 加探针 报告基因（含荧光素分子） 变性 DNA杂交 （如检测SARS病毒等） a b c d ①检测是否插入目的基因，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的DNA杂交，看是否有杂交带。 ②检测是否转录出了mRNA，利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA杂交，看是否有杂交带。 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原－抗体杂交，看是否有杂交带。 ④还可以进行个体水平的鉴定，根据其性状。 提示：①DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA，然后高温解成单链，再与同位素标记的DNA探针杂交；②抗原－抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的。 32．（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗， 饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备 过程相关的图和表。(08江苏) 请根据以上图表回答下列问题。 （1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的 DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是 耐高温 （2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数 量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2 为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高 的退火温度？__________。 引物对B （3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱 基序列是否有专一性要求？ 。 （4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的 细菌B通常为 。 否 农杆菌 （5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，。假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。 ①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 ②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。 2 1 * 一、基因工程的基本内容 基因工程，确切地讲就是重组DNA技术，指在体外将不同来源的DNA进行剪切和重组，形成杂合DNA或称嵌合DNA分子，然后将其导入特定的宿主细胞，得到大量扩增和表达，使宿主细胞获得新的遗传特性，产生新的基因产物。基因工程，或称遗传工程，兴起于20世纪70年代。人类实现对基因进行自如地操作、转移和改造的理想，是在核酸限制性内切酶、载体质粒、连接酶和其它修饰酶被陆续发现以后。在此基础上，核酸和蛋白质序列测定、基因体外快速突变、DNA的人工合成等，则使得基因工程逐渐成熟和发展。 结　　果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 生物体外 基因 ＤＮＡ分子水平 剪切 拼接 导入 表达 人类需要的基因产物 基因拼接技术或DNA重组技术 实质：基因重组 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 苏云金芽孢杆菌 (有抗虫特性) 普通棉花(无抗虫特性) 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 提取 关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取。 关键步骤二：抗虫基因与运载体DNA连接。 关键步骤三：抗虫基因进入棉细胞。 通过观察抗虫棉的培育过程，你认为关键的步骤是什么？ 关键步骤一的工具：基因的剪刀——限制性内切酶。 关键步骤二的工具：基因的针线——DNA连接酶。 关键步骤三的工具：基因的运输工具——运载体。 1、作用——限制性核酸内切酶能识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并在使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 磷酸二酯键 即脱氧核糖、磷酸之间的连接 A T G G C A T C T T C G A A 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，例如，EcoRΙ、SmaΙ，也有少数有4、5或8个核苷酸组成。 G A A T T C C T T A A G 中轴线 C T T A A G A A T T C G 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，SmaI识别CCCGGG序列: C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C 黏性末端 平末端 G A