专题基因工程DNA重组技术的基本工具.分析.ppt

基因工程 DNA重组技术的基本工具 限制性内切酶作用过程 “分子手术刀” DNA连接酶的作用过程 基因的载体 质粒 * 1.1DNA重组技术的基本工具 专题1 基因工程 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 “分子缝合针” “分子运输车” 限制性核酸内切酶(简称限制酶) 1、基因的剪刀（分子手术刀） 点击播放 切点： 主要在原核生物中 分布： 特点： 磷酸二酯键 特异性 EcoRⅠ限制酶只识别GAATTC，并在GA间切割 SmaⅠ限制酶只识别CCCGGG，并在GC间切割。 例如： 限制性核酸内切酶(简称限制酶) 一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。 CT TCATGAATTCCGTACCCGGGCCTAA GAAGTACTTAAGGCATGGGCCCGGATT EcoRⅠ限制酶酶切位点 GGCATGGG AATTCCGTACCC 黏性末端 CTTCATG GAAGTACTTAA 平末端 SmaⅠ限制酶酶切位点 GGGCCTAA CCCGGATT 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 GAA TTC ＣTT AAG 如EcoR1 如Sma1 CCCGGG GGGCCC G ＣTT AA AA TTC G GGG CCC CCC GGG 黏性未端 平末端 识别的DNA分子碱基排列特点 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 DNA连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位？ “分子缝合针” DNA连接酶 CTTAA G AATTC G 磷酸二酯键 点击播放 “分子缝合针” DNA连接酶种类 共性 连接末端类型 来源 T4DNA连接酶 E·coliDNA连接酶 种类 T4噬菌体 大肠杆菌 只能连接黏性末端 既可连接黏性末端，又可连接平末端。 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等。 “分子运输车” 载体必须具备的条件： 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等） 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 4、对受体细胞无害。 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用载体在受体细胞内对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 是细菌染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。 要对天然质粒进行人工改造 是基因工程最常用的运载体 质粒的特点 1、广泛地存在于细菌中， 2、具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入其中 4、具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择 3、可在受体细胞中自我复制或整合到染色体DNA上进行同步复制 质粒 病毒 (噬菌体和动植物病毒) 基因的载体 “分子运输车” 难点突破 单酶切与双酶切 … …