细胞化学染色详解.pptVIP

第二节 细胞化学染色检验 瑞氏染色的原理 瑞氏染料中含有碱性亚甲蓝和酸性伊红两种成分,它们与细胞内的各种物质具有不同的亲和力,使其显现出不同的色调,以利辨认. 1.细胞核是由核糖核酸与强碱性的组蛋白,精蛋白形成核蛋白,与酸性染料伊红有亲和力,染成红色. 2.幼稚细胞的胞质和核仁含有酸性物质,与碱性染料亚甲蓝有亲和力,染成蓝色. 主要的鉴别点:酸碱性 各种原始细胞的鉴别 定义： 细胞化学染色是细胞学和化学相结合的一 门科学。它是以细胞形态学为基础，根据 化学反应的原理、应用涂片染色的方法观 察细胞的化学成分及其变化的重要方法。 各种类型血细胞的化学成分（酶，脂，糖，蛋白，核酸）,分布及其量不完全相同,在病理情况下,血细胞的成分可发生改变. 研究的对象：细胞和组织中的化学物质 研究的方法：根据细胞和组织中化学物质的有无以及强弱判断血细胞类型以及是否发生异常.  细胞化学染色的临床应用 1、 辅助诊断急性白血病的细胞类型（不同系别，不同阶段的细胞所含化学物质不同）； 2、 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断（IDA、 CML与类白）。 一、铁染色 原理： 正常人骨髓中的储存铁主要存在于骨髓小粒和幼红细胞中。骨髓小粒中的含铁血黄素称细胞外铁，其中的三价铁与分子中的蛋白质结合不牢，经稀盐酸处理后而游离，并能在酸性亚铁氰化钾溶液中产生普鲁士蓝反应。细胞内铁也可用此法显示。根据反应的强弱了解骨髓中铁的含量。 细胞内铁：中、晚幼红细胞胞浆中有蓝绿色颗 粒,为铁蛋白. 铁粒幼细胞：胞质内有蓝绿色颗粒的幼红细胞. 环铁粒幼红细胞：胞质内有蓝绿色颗粒在6个以 上，并围绕于核周排列成环形者，超过1/2区域. 细胞外铁：正常骨髓以含铁血黄素形式储存的 铁，主要存在骨髓小粒的巨噬细胞的胞质内或 外。正常情况下 +~++ 细胞外铁反应强度的判断标准： 环形铁粒幼细胞 环形铁粒幼细胞 参考值 1、细胞外铁：（＋）～（＋＋） 2、细胞内铁：观察100个幼红细胞,计算出铁粒幼红细胞百分比,阳性率为12％～44％,无环形铁粒幼红细胞和铁粒红细胞。 铁的生成和利用 食物中的铁经吸收后在单核吞噬系统内储存, 铁通过幼红细胞表面的铁受体,转至幼红细胞内,与原卟啉结合形成血红素. 细胞外铁:单核吞噬系统内的铁,反映骨髓的储存铁 细胞内铁:幼红细胞和红细胞内的铁,骨髓可以利用的铁. 几种病理情况, 1.体内铁摄入不足或消耗过多:骨髓细胞内外铁均减少或消失(IDA) 2.铁利用障碍:幼红细胞线粒体合成血红素功能障碍,为铁失利用,内外铁均增加(铁粒幼细胞性贫血) 3.铁储存于单核吞噬细胞内不能被释放入幼红细胞内,为铁失利用,外铁增加,内铁减少(慢性炎症贫血) 疾病鉴别意义： 缺铁贫：外铁明显下降，甚至消失；内铁下降,铁粒幼细胞减少。经铁剂治疗后，铁增加. 铁粒幼细胞贫血：内、外铁增加，且出现环铁粒幼红细胞增多,有时可见铁粒红细胞. 感染、肝硬化、慢性肾炎、尿毒症、恶性肿瘤：外铁增加,内铁减少。 骨髓增生异常综合症:环形铁粒幼细胞大于有核红细胞的15%,细胞外铁也常增加. 二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） 原理:成熟中性粒细胞内的AKP在PH 9.4~9.6缓冲 液中能水解基质液中的α-磷酸柰酚，产生α-奈 酚，其与重氮盐偶联，形成不溶性灰黑色偶氮染 料沉淀，定位于酶活性处。 AKP主要存在于中性成熟粒细胞内,其他细胞基 本阴性. 阳性程度： - —— 胞浆中无紫黑色颗粒 + —— 胞浆中有一层棕黑色不透明或局限地方 有紫黑色颗粒(约1/4) ++—— 胞浆中颗粒占胞浆1/2或遍布整个胞浆，但较疏松 +++—— 胞浆中颗粒占3/4，颗粒染色浓 ++++——仅见核影，其余均是黑色 结果统计: 1.阳性率计算: 100个中性杆状,分叶核粒细胞中阳性细胞总数. 2.AKP积分的计算 积分：-——0分 举例：细胞数 积分 +——1分 5 5*0——0 ++——2分 5 5*1——5 +++——3分 10 10*2——20 ++++——4分 20 20*3——60