原核生物基因表达调控技术方案.pptVIP

4) 蛋白质合成水平的自体调控 指一个基因的表达产物蛋白质或者RNA反过来控制自身基因的翻译表达。 严紧反应(stringent response)：指细菌生长在不良营养条件下时，缺乏足够的AA等因素所导致的蛋白质合成突然下降，tRNA合成突然停止等一系列反应。此时细菌将关闭大量的代谢途径，仅进行很少的代谢，以维持基本生存。 应急反应的信号是鸟苷四磷酸（ppGpp）和鸟苷五磷酸（pppGpp）。产生这两种物质的诱导物是空载tRNA。 ppGpp—四磷酸鸟苷(魔斑I magic spot I) pppGpp—五磷酸鸟苷(魔斑II magic spot II) 是调控一些反应的效应物，有多种功能，但主要功能是 ①抑制rRNA基因的启动子； ②抑制多数或大多数基因转录的延伸 5）严谨反应与核糖体合成的调控 当氨基酸饥饿时，细胞中便存在大量的不带氨基酸的tRNA，这种空载的tRNA会激活ppGpp 合成酶（RelA/应急因子），使ppGpp大量合成，其浓度可增加10倍以上。ppGpp的出现会关闭许多基因，当然也会打开一些合成氨基酸的基因，以应付这种紧急状况。 关于ppGpp的作用原理还不大清。ppGpp与pppGpp的作用范围十分广泛，它们不是只影响一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以它们是超级调控因子。 当细菌的生存条件恢复正常时，spoT 降解ppGpp ，细菌严谨反应消失。 六. 核开关和群体感应 1. 核开关（riboswitch) 90年代末-20世纪初，耶鲁大学的Ronald Breaker小组发现大肠杆菌细胞内存在维生素B12的核开关； 核开关是一类通过结合小分子代谢物调控基因表达的mRNA元件.它位于特定的mRNA区域,可以不依赖任何蛋白质因子而直接结合小分子代谢物,继而发生构象重排,影响该mRNA的活动. 核开关可以同小分子效应物结合，通过改变自身的结构，打开或关闭基因的表达。 核开关（riboswitch) 转录调控 翻译调控 核开关主要通过与合成代谢终产物的相互作用，在转录水平和翻译水平调控基因的表达。 2.群体感应 群体感应 (quorum sensing)是细菌根据细胞密度变化进行基因表达调控的一种生理行为.具有群体感应的细菌能产生并释放一种被称为自体诱导物(autoinducer)的信号分子,它随着细胞密度增加而同步增加。当自体诱导物积累到一定浓度时会改变细菌特定基因的表达，如产生毒素、形成生物膜、产生抗生素、生成孢子、产荧光等,以适应环境的变化。 费氏发光弧菌在鱿鱼的发光器官中高密度存在，能合成荧光素酶。 Pr Pi 2） 阿拉伯糖操纵子特点 ara操纵子的调控有三个特点： 第一，araC表达受到AraC的自动调控。 第二，AraC既可充当阻遏物，也可作为激活剂。 第三，cAMP与CAP结合可作为正调节物诱导ara操纵子表达。 有葡萄糖，缺阿拉伯糖 有阿拉伯糖，没有葡萄糖存在 葡萄糖和阿拉伯糖都存在 1）色氨酸操纵子的结构 色氨酸操纵子(tryptophane operon)负责色氨酸的生物合成，当培养基中有足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺乏色氨酸时操纵子被打开，其结构基因表达，为可阻遏的操纵子模型。 由于trp体系参与生物合成而不是降解，它不受葡萄糖或cAMP-CAP的调控。 5.色氨酸操纵子 色氨酸的合成分5步完成。每个环节需要一种酶。这5种酶的基因紧密连锁在一起，被转录在一条多顺反子mRNA上。 5个基因分别以trpE、trpD、trpC、trpB、trpA代表，编码了与色氨酸合成有关的五种酶。 trp操纵子中产生阻遏物的基因是trpR，该基因距trp基因簇很远，后者在大肠杆菌染色体图上25cM处，而前者则位于90cM处。 2）trp操纵子的阻遏机制 trpR基因产物为无活性的阻遏蛋白，此蛋白平常不与操纵区相结合。 当培养基中有色氨酸时，该阻遏蛋白与色氨酸相结合形成有活性的阻遏物，与操纵区结合并关闭trp mRNA转录。 3）色氨酸操纵子的弱化系统 1）前导肽及其序列结构 ? 在trp mRNA 5‘端trpE基因的起始密码前有一个长162bp的 mRNA片段被称为前导区。 研究弱化子序列，发现该区mRNA通过自我配对可形成茎-环结构，有典型的终止子特点。 研究发现，当mRNA合成起始以后，如果培养基中有色氨酸，转录总是在前导区终止，产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子，终止trp基因转录。 2）mRNA前导区序列分析 3）转录的弱化效应 （1）当培养基中色氨酸的浓度很低时，负载有色氨酸的tRNA也就少，这样翻译通过两个相邻色氨酸密码子的速度就会很慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1