a-淀粉酶对淀粉水解作用的观察.docVIP

实验 a-淀粉酶对淀粉水解作用的观察 实验原理： a-淀粉酶（EC 3.2.1.1）是一种内切淀粉酶，可将淀粉链水解为不同长度的多聚葡萄糖。随着降解时间延续，多聚糖链不断变短，最终生成不同聚合度的寡聚糖和分支低聚糖的混合物。直链淀粉遇碘变蓝色，不同降解度的淀粉，谓之糊精。其与碘呈色各异。a-淀粉酶降解直链淀粉过程如下： 水解过程：淀粉→蓝糊精→红糊精→无色糊精→麦芽糖→葡萄糖 （蓝色）（蓝色）（红色） （无色） a-淀粉酶水解淀粉的终产物约1/3是G1～G6；37.5%是G7～G12；其余是分子更大一些的低聚糊精。后两类产物包括各种分支糊精，即a-糊精。工业用酶需Ca2+，一般反应温度70℃以上，pH6～7。 二、实验步骤 1、淀粉水解过程观察： 1%淀粉液 a-淀粉酶 水 试管1 2ml 10滴 试管2 2ml 10滴 70℃水浴→每过2-3min（统一为2min）→吸取反应液5滴于点滴板小穴中→加0.5%碘液1滴，混匀→观察。 反应温度对a-淀粉酶的影响： 1%淀粉液 温度 10min后 加酶液0.5 mL（依次间隔1min） 试管1 2mL 室温 + + 试管2 2mL 50℃ + + 试管3 2mL 60℃ + + 试管4 2mL 70℃ + + 每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至生成无色糊精为止。（控制酶量，以控制反应能在15min～20min完成为宜。） 提问：为什么要保温10min再加入酶液？为什么要间隔1min再加入？ 反应pH值对a-淀粉酶的影响： 1%淀粉液 pH 温度 酶液 试管1 2mL 4.0 70℃ 5 mL 试管2 2mL 6.0 70℃ 5 mL 试管3 2mL 约7.0（水） 70℃ 5 mL 试管4 2mL 8.0 70℃ 5 mL 每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至生成无色糊精为止。 Ca2+对a-淀粉酶的影响： 准备：1支试管→加a-淀粉酶2mL→加0.1 mol /L EDTA 0.2 mL→摇匀→得去Ca2+ 酶液 1%淀粉液 酶液0.5 mL 温度 试管1 2mL a-淀粉酶液 70℃ 试管2 2mL 去Ca2+ 酶液 70℃ 每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至加酶液一管生成无色糊精为止。 三、根据实验现象，分析整理实验结论。