NY_T2741-2015仁果类水果中类黄酮的测定液相色谱法.docVIP

ICS 67.080B 31 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2741—2015 仁果类水果中类黄酮的测定液相色谱法 Determination of flavonoids in pome fruits—Liquid chromatography 2015-05-21 发布 2015-08-01 实施 中华人民共和国农业部发布 刖 本标准按照GB/T 1. 1—2009给出的规则起草。 本标准由农业部种植业管理司提出。 本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC 510)归口。 本标准起草单位:中国农业科学院果树研究所、农业部果品及苗木质量监督检验测试中心(兴城）。 本标准主要起草人:李静、聂继云、李志霞、李海飞、徐国锋、闰震、匡立学、毋永龙。 仁果类水果中类黄酮的测定液相色谱法 1范围 本标准规定了液相色谱法测定仁果类水果中类黄酮的方法。 本标准适用于仁果类水果(苹果、梨和山楂)中主要类黄酮含量的测定。 本标准的方法检出限和定量限见附录A。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 仁果类水果中的类黄酮物质经乙醇溶液超声提取后，经固相萃取小柱净化，在反相C18色谱柱上 分离后，用紫外/二极管阵列检测器检测，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1试剂 4. 1.1盐酸(HC1):优级纯。 4. 1.2甲酸(CH202):色谱纯。 4. 1.3甲醇(CH40):色谱纯。 1.4 乙醇(C2H60)。 4.1.5乙腈(C2H3N):色谱纯。 1.6 80%乙醇溶液:取乙醇(4. 1.4)800 mL，加人200 mL水，超声2 min混匀。 4.2标准品 23种类黄酮标准品:纯度98%，名称见附录A。 4.3标准溶液配制 4. 3. 1单一组分标准溶液:准确称取类黄酮标准品各5. 0 mg,甲醇定容至10. 0 mL,配制成500 mg/L 标准储备液，_ 18°C以下贮存，备用。 3. 2混合标准溶液:混合标准溶液分为3组，其中组I和组m用于苹果和山楂果实中类黄酮的定量， 组n和组m用于梨果实中类黄酮的定量。按照附录a中组别，根据各种黄酮类物质在仪器上的响应 值，逐一吸取一定体积的单一组分标准溶液配制成混合标准溶液，再稀释成不同质量浓度的混合标准溶 液，用于制作标准工作曲线，混合标准溶液现用现配。 4.4材料 4. 1有机相微孔滤膜:0. 22 fzm。 4. 4. 2 C18 固相萃取小柱:200 mg，6mL。 5仪器 1液相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 5.2电子天平:感量为o.oi g和o.oool g。 5. 3离心机:可达8 000 r/min以上。 5. 4超低温冰箱：（一80±5)°C。 5.5超声波清洗器:40 kHz。 5.6旋转蒸发仪:带有温度控制。 6试样的制备 果实洗净擦干，取可食部分切碎混勻，四分法取约250 g，液氮冷冻，研成粉末，一80°C贮存备用。 7分析步骤 7. 1提取 称取10 g试样(精确到0? 01 g)于50. 0 mL棕色离心管中，加人约25 mL 80%乙醇溶液(4. 1. 6)，混 合，室温下超声15 min，8 000 r/min离心5 min,上清液转人50. 0 mL棕色容量瓶中，残渣再用约15 mL 80%乙醇溶液按上述步骤重复提取1次，合并2次提取液，用80%乙醇溶液定容至50. 0 mL,备用。 7.2浓缩 准确吸取10 mL提取液(7. 1)于100 mL旋转蒸发瓶中，35°C下减压蒸发除去乙醇，浓缩至约3 mL。 7. 3净化 C18固相萃取小柱(4. 4. 2)依次用约5 mL甲醇和约5 mL水预淋洗、活化后，将7. 2浓缩液加至小 柱中，旋转蒸发瓶用5 mL水清洗，清洗液转入小柱中，抽滤，弃除滤液。再用约8 mL甲醇分2次清洗 旋转蒸发瓶，清洗液加人到小柱中，收集滤液，甲醇定容至10. 〇 mL,过滤膜(4. 4. 1)，待测定。 7.4试剂空白试验 仅不加人样品，其他提取、浓缩和净化过程同样品相同。 7.5测定 7.5.1色谱参考条件 检测波长:280 nm、360 ran和520 nm，各组分定量波长见附录A。 色谱柱:C18色谱柱，柱长250 mm，内径4. 6 mm，颗粒度5 ym，或性能类似的色谱柱。 柱温:40°C。 流速:〇? 8 mL/min。 流动相A:20%甲酸;流动相B:100%乙腈。 进样量:10 juL。 流动相梯度洗脱程序见表1。 表