阿尔茨海默病相关基因白细胞介素18(IL18)启动子区多态性对其转录活性影响论文.doc

阿尔茨海默病相关基因白细胞介素 18（IL18)启动子区多态性对其 转录活性的影响 研究生：张惠丽  导  师：王延平  中文摘要 【研究背景】阿尔茨海默病(Alzheimers disease, AD)是一种主要在老年期 发生的以进行性痴呆为主要特征的神经元退行性疾病。AD 的病因尚未明确，众多 研究表明其与脑内慢性炎症反应相关。IL18 作为一种炎症细胞因子，近年越来越 多被证实与 AD 发病相关。IL18 基因调控区存在－607C/A（RS1946518）、－137G/C （RS187238）等 SNPs，已有文献报道多态性与老年性痴呆发病间的关系，但未 见这两处基因多态性对 IL18 基因转录活性影响的报道。 【研究目的】本课题通过分子生物学技术，建立 IL18－607C/A、IL18－137G/C 野生型和突变等位基因的 PGL4.10 重组试验质粒，在细胞水平研究－607C/A 突 变、－137G/C 突变对 IL18 基因转录调控的影响。 【方法】选取双荧光报告基因系统（ pGL4.10（luc2) Basic 及 pRL-TK ) 作 为报告基因载体，用基因重组和定点突变技术构建含不同 SNP 型的 IL18 启动子 报告基因质粒，转染人胚胎肾细胞系 293 细胞（HEK293)，计算不同 SNP 各启动 子的相对荧光素酶活性（relative luciferase activity ，RLA) 【结果】 所 构 建 的 各 SNP 型 质 粒 均 具 有 明 确 的 启 动 子 活 性 ； 突 变 质 粒 -607A/-137C、-607C/-137G 及-607C/-137C 与野生质粒-607A/-137G 相比，转录 活性均有显著性差异，（P0.01）；而单位点突变质粒-607A/-137C、-607C/-137G 与两位点突变质粒-607C/-137C 转录活性相比均无差异性(P0.05)。 【结论】-607 、-137位点碱基的突变均可影响IL18基因的转录，-607A/-137C、 -607C/-137G及-607C/-137C 均上调了IL18基因的转录活性，致IL18蛋白表达水 平增加，促进神经炎症的病理过程，可能导致AD的发生。 1 【关键词】基因多态性； IL18 启动子；荧光素酶报告分析；阿尔茨海默病 The transcriptional activity of interleukin 18 gene ( IL18) promoter polymorphisms in Alzheimer’s disease abstract  Background:  Alzheimer’s disease is an neuronal degenerative  disorder that is mainly characterized by progressive dementia in the old.  Although etiology is not clear, numerous studies demonstrate  that  it  is related to the chronic inflammatory response in brain. As a inflammatory cytokine, IL18 has been confirmed to relate with AD. SNPS including －607C/A （RS1946518）、－137G/C（RS187238）exist in IL18 gene regulatory region. The relationship between SNPS and AD have been reported ,but so far, SNPS in the promoter region affect IL18 promotor activity that haven’t been reported.  Objective: Through －607C/A、IL18－137G/C  molecular biological technique, construct IL18 wild-type and mutant-type pGL4.10 vector .The  effort of－607C/A、－137G/C polymorphism on promoter activity have been researched at cell line.  Method:  We selected the Dual-Luciferase reporter assay system  (