第二章__中药化学成分的一般研究方法综述.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * 以下几点不宜采用CCD法： ① 试样极性过大或过小 ② 分配系数受浓度或温度影响过大 ③ 易于乳化的萃取溶剂系统 * 该装置中分离管虽然是玻璃材料，但因为整组固定，不易破损。并且分配用的两相溶剂不必震荡，因此不易乳化或产生泡末，特别适合皂苷类的分离 原理：液——液萃取　　 使流动相呈液滴形成垂直上升或下降。通过固定相的液柱，进行分离，见书P24，图1—17。 优点：不振摇，不易乳化或产生泡沫，适用于皂苷类成分。 * * * * * * * * * 葡聚糖凝胶（Sephadex）：是由平均分子量一定的葡聚糖及交联剂交联聚合而成。 Sephadex G-25： G=Gel（硅胶） 数字 = 吸水量 × 10，因此，G-25 = 2.5 ml/g LH-20 为Sephadex G-25 经羟丙基化处理后得到的产物。 即：葡聚糖凝胶分子中的葡萄糖部分上的羟基与羟丙基结合生成的醚键形式。 吸附作用主要靠氢键 * * * * 预处理原因：树脂中含有未聚合的单体、致孔剂（多为长链的脂肪醇类）、分散剂、和防腐剂等，使用前必须经过处理除去。 处理方法：一般D型的大孔吸附树脂先用95%的乙醇浸泡24小时，湿法装柱，用95%的乙醇洗至流出液与水1：2混合不产生混浊，改用大量水洗，至无乙醇味道为止。 洗脱液的选择 根据吸附力的强弱选用不同的洗脱剂。 对非极性大孔吸附树脂，洗脱剂极性越小，洗脱能力越强。 对中极性大孔吸附树脂和极性较大的化合物，用极性较大的有机溶剂较合适。 为达到满意的效果，可设几种不同浓度洗脱，以确定最佳洗脱液浓度。 * 大孔吸附树脂是一种表面吸附剂，其吸附力与树脂的比表面积、表面电性、能否与被吸附物形成氢键等有关。引入极性基团可以改变表面电性或使其与某些被分离的化合物形成氢键，影响吸附作用。 极性：分子的极性大小直接影响分离效果。 极性较大的分子：适于在中极性的树脂上分离， 极性小的分子：适于在非极性的树脂上分离。 分子大小： 有机物通过树脂的网孔扩散到树脂的网孔内表面而被吸附，因此树脂吸附能力大小与分子体积密切相关。 分子体积较大的化合物：选择较大孔径的树脂，否则将影响到分离效果。 通常一种成分在某种溶剂的溶解度大，则在该溶剂中，树脂对该物质的吸附力就小，反之亦然。故在上样溶液中加入适量的无机盐（如氯化钠、硫酸钠、硫酸铵）可使树脂的吸附量加大。 溶剂PH值：一般而言，酸性化合物在酸性溶液中进行吸附，碱性化合物在碱性溶液中进行吸附较为合适，中性化合物可在近中性的情况下被吸附 一般控制在一个柱体积／小时为宜 中药碱性成分用阳离子交换树脂；酚、酸性成分用阴离子交换树脂，将交换后的树脂通过调整酸碱使吸附物游离，选择适当溶剂将吸附物溶解出即可。 应用：主要用于生物碱（盐）、酚类、有机酸及氨基酸、蛋白质、多糖等可离子化成分的分离纯化。 操作：装柱前用水充分溶胀，并用酸、碱进行预处理。 OH- 阴离子交换树脂 Cl- 阴离子交换树脂 NaCl 强碱性（-N+(CH3)3Cl-） 弱碱性（-NH2, -NH-） 强酸性（-SO3-H+） 弱酸性 （-COOH） H+ 阳离子交换树脂 Na+ 阳离子交换树脂 4、大孔吸附树脂法 原理：通过物理吸附（范德华力、氢键吸附）有选择性的吸附有机物质。 特点：既有吸附性，又有分子筛筛选性 吸附性是范德华力或氢键吸附的结果；筛选性则由其多孔性网状结构引起。 理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂 特性 对有机物选择性好，吸附速度快 可反复利用，再生处理方便 物质洗脱顺序： 具有反向性质，被分离物质极性越大，越先被洗脱下来，极性越小，越后洗脱下来。 溶剂洗脱力： 极性大溶剂＜极性小溶剂 树脂柱的清冼和再生： 乙醇、丙酮、异丙醇、2-5%盐酸、2-5%氢氧化钠渗漉法洗脱或回流，最后用水洗至无味 操作： 预分离成分水溶液上样过树脂柱，依次用水浓度由低到高的含水醇洗脱，则物质按极性从大到小的顺序被洗脱下来。 预处理 95% EtOH浸泡→湿法装柱 →95% EtOH洗脱 →水洗至无醇味 上样 湿法上样 洗脱 水/酸碱液/低浓度醇除杂质→ 依据吸附力选择洗脱液 再生 5% NaOH浸泡→洗至中性 →5% HCl浸泡→洗至中性 丙酮浸泡/回流 大孔吸附树脂的使用流程 影响大孔树脂吸附作用的因素 树脂 洗脱剂 样品 非