Diversin通过JNK促进非小细胞肺癌的增殖与侵袭能力.pdf

目 录 一、摘要 中文论著摘要………………………………………………………………1 英文论著摘要………………………………………………………………6 二、英文缩略语…………………………………………………………………13 三、论文 前言…………………………………………………………………………14 实验材料与方法……………………………………………………………15 实验结果……………………………………………………………………20 讨论…………………………………………………………………………27 结论…………………………………………………………………………29 四、本研究创新性的自我评价…………………………………………………30 五、参考文献……………………………………………………………………31 六、附录 综述…………………………………………………………………………33 在学期间科研成绩…………………………………………………………4l 致谢…………………………………………………………………………42 个人简介……………………………………………………………………43 ·中文论著摘要· 刖 吾 信号相关。研究发现在新生小鼠和成鼠脑内，Diversin表达于室下区和海马区的神 经母细胞和成熟神经元，并证实Diversin可以促进其增殖活性。在胚胎发育过程 的作用。Diversin蛋白位于细胞的中心小体，这种独特的细胞器以及衍生的纤毛在 许多信号通路，包括Hedgehog,Wnt，PDGF和FGF中扮演了重要的角色。 目前Diversin在人类肿瘤中的表达情况及意义尚不清楚，其是否具有调控肿 瘤细胞增殖或侵袭的能力及分子机制等都有待于进一步探讨。在本研究中，我们 中重要蛋白的影响，初步探讨了Diversin对肺癌细胞增殖侵袭的影响和可能的作 用机制。 材料与方法 一、组织标本与患者资料 ． 科大学附属第一医院病理科2004．2006年存档蜡块。在167例肺癌病例中具有完 整随访资料的74例。随访是从手术之日起到随访结束日期或由于复发、转移而死 第七版国际抗癌联盟肺癌TNM分期标准，I期56例，II期32例，ⅡI期74例， Ⅳ期5例。根据WHO2004肺癌组织学分类标准，腺癌94例，鳞癌73例。所有 患者术前均未接受化疗或放射治疗。为用于蛋白质分析，另收集20例新鲜的肺癌 组织及相对应的癌旁正常的肺组织，保存在．70℃冰箱内。 二、-免疫组织化学染色 手术切除的组织均经过10％中性福尔马林固定后，石蜡包埋，制成41am切片， 采用sP免疫组化法进行染色。一抗使用鼠源性的Dive．in，以l：100(Anti．Diversin Cruz 购于Santa USA)4℃孵育过夜。以PBS代替一抗作为空 Biotechnology， 判定：每张切片随机选择5个视野，每个视野计数100个瘤细胞。根据计数细胞 着色的百分比，将Diversin的表达划分为5个等级：无着色为0分，1％一25％为1 度，将Diversin的表达划分3个等级：无着色为0分，浅黄色颗粒为1分，深黄 色或者黄褐色颗粒为2分。将二者相乘，所得乘积即为该切片的最终得分。Diversin 阳性表达定位于胞浆和胞膜。根据38例正常的支气管上皮染色后，其得分均为 3分，于是实验中将得分3分的计为阴性表达(正常表达)，而得分≥3分的计 为阳性表达(高表达)。 三、细胞培养 and A549，H1299 (Invitrogen)消化传代。 2 四、质粒构建与转染 Delbrueck—Center Birchmeier教授(Max pcDNA3．1．HA．Diversin质粒由Walter forMolecular