对β-胡萝卜素测定方法的认识要点.docVIP

对 Β - 胡 萝 卜 素 测 定 方 法 的 认 识 姓名：邹俊楠 班级：应用化学122班 学院：化学工程学院 学校：新疆农业大学 对β-胡萝卜素测定方法的认识 摘要：食品中的β-胡萝卜素可以用纸上层析法、薄层色谱法、分光光度法及高效液相色谱法等方法测定。本文简述了这些方法的原理条件及优缺点，并谈了谈自己的认识。 Β-胡萝卜素作为维生素 A的前体，是人体重要营养素，也能够影响蛋白质的合成和利用，促进体内软组织的生长发育。同时，β-胡萝卜素还有一定的防癌作用。因此，对β-胡萝卜素的研究倍受广注。 β-胡萝卜素分子中存在多个共轭双键结构，对许多物理、化学、生物等因素都不稳定，例如光辐射、高温、酸、碱、游离卤素、水分等，但氧是影响胡萝卜素稳定的主要因素。它不溶于水、丙二醇、甘油、酸和碱，溶于二硫化碳、苯、氯仿、己烷及植物油等，几乎不溶于甲醇和乙醇。 1 测定方法 1·1 天然β-胡萝卜素的提取 取切碎混匀的菜样30g，加入适量水(一般约l：0.5—2)，于捣碎机中捣碎，使匀浆呈稠糊状。 因β-胡萝卜素对弱碱比较稳定，所以选用氨水：乙醇（5:35）作为稳定剂。稳定剂可以加快沉淀且使沉淀完全，从而减少β-胡萝卜素损失，提高提取率。 加入2%的CaCl2·2H2O其沉淀量最大，且β-胡萝卜素的含量最高。 因β-胡萝卜素是脂溶性物质，可以溶解在有机试剂中，根据相似相溶规律和β-胡萝卜素的理化性质，我们选用亲脂性较强的有机溶剂。 为避免β-胡萝卜素的不必要损失，在除去溶剂时应避免高温，故应优先选择低沸点的溶剂。 同时，根据β-胡萝卜素在不同溶剂中的溶解度；可以得出石油醚可以作为很好的β-胡萝卜素的溶剂。 因为蔬菜糊中含有大量的水分，直接选用石油醚很难从其中萃取β-胡萝卜素，选用水溶性的丙酮和石油醚的混合液萃取，这样丙酮会有效地使渣干燥因而在随后的萃取中，色素可以高效地进入萃取液，提高了萃取率。 故在萃取过程中，为了提高萃取率，应加入氨水：乙醇（5:35）作为稳定剂，2%的CaCl2·2H2O作为沉淀剂；用石油醚和丙酮混合物作为提取剂。 1·2 测定 1·2·1 纸层析法 食品中的胡萝卜素可用生物学鉴定、溶剂分配和层析技术测定。50年代色层分析测定胡萝卜素已为世界广泛采用，中国医学科学院当时亦采用柱层析法。直至1975年，AOAC仍为柱层析法，但已不断改进。1952年Bauer曾提出类胡萝卜素的纸上层析法。 1·2·1·1 点样 准确吸取待检液0.1—0.2m l (随胡萝卜素含量而定)在滤纸下端基线上A B两点间和CD两点间迅速来回进行带状点样(见图1)，一 次点完。 若按常规点状点样，需时约20分钟，且展开慢。故用改进的带状点样，只需10秒钟左右就能点完，展开速度比常规点样快，而且分离效果好。 1·2·1·2 展开 将滤纸卷成圆筒状，固定两边后放入事先用石油醚饱和的层析缸 内，进行上行展开(见图2)。(注意:纸纹方向与展开方向一致；缸内石 油醚深度约1cm即可。) 1·2·1·3 洗脱 取出滤纸自然挥发石油醚，将位于展开剂前沿的胡萝卜素层析带剪下，放入盛有5ml石油醚的具塞试管中，用力振荡，使胡萝卜素完全溶于溶剂中。 1·2·2 薄层色谱法 薄层色谱法是在一定尺寸的表面平整的玻璃、铝板或塑料板上，把硅胶、纤维素、氧化铝、聚酰胺或化学键合硅胶等吸附剂铺成薄层(通常厚度为0.10～0.25mm)作为固定相，用展开剂(流动相)把被测样品展开，从而进行色谱分离和分析的方法。 1·2·2·1 制板 取30g硅胶G和70g的1%KOH溶液铺制2*5cm，0.25cm厚的薄板，风干后在105℃下活化1h。 1·2·2·2 点样及展开 用微量定量点样管将β-胡萝卜素的样品溶液点于上述的薄层硅胶板上。 将点样后的薄层板置于石油醚-丙酮混合液(100：5)饱和的层析缸内，于暗处展开，展开时间为50min，因为β-胡萝卜素极易被氧化，展开时间超过一小时后，β-胡萝卜素会迅速变化。后观察黄色斑点位置并计算各斑点的Rf值。 1·2·3 分光光度法 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 1·2·3·1 测定波长的选择 精密称取干燥至恒重的β-胡萝卜素对照品适量，用少量氯仿溶解后，再用环己烷配置成2.5μg/ml的溶液，在400~500nm波长之间扫描可见光吸收光谱，可得到最大吸收波长为455±1nm。因此选择测定波长为455nm。 β-胡萝卜素溶于氯仿，β-胡萝卜素对照品也极易溶于氯仿，所以选择氯仿为溶剂。 1·2·3·2 绘制标准曲线 精密称取干燥