Tauc1q双转基因小鼠模型的建立与c1q影响Tau蛋白磷酸化的研究.pdf

Tau+／clq-／-双转基因小鼠模型的建立及clq影响 Tau蛋白磷酸化的研究 摘 要 第一部分 Tau+／clq-／．双转基因小鼠模型的建立 背景：神经原纤维缠结(neurofibrillarytangle，NFTs)是阿尔茨海 默病(Alzheimer’S 要成分是异常过度磷酸化的Tau蛋白。Tau蛋白是一种广泛分布在 中枢神经系统细胞内的重要的微管相关蛋白，与微管共同构成细胞 骨架结构，其生理功能主要为诱导与促进微管蛋白聚合成微管并防 止微管解聚以及维持微管结构与功能的稳定。当Tau蛋白在各种情 况下出现异常过度磷酸化等修饰，将失去对微管的稳定作用，进而 导致神经退行性变。AD的发病机制目前尚不清楚。近年来随着研究 的不断深入，发现由神经胶质细胞主导的颅内慢性炎性反应在AD 发病过程中起了重要作用。补体系统是机体体液免疫的重要组成部 人和动物血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的蛋白质，主 要由肝脏产生。目前已知补体是由30余种可溶性蛋白、膜结合性蛋 白和补体受体组成的多分子系统，故称为补体系统(complement system)，主要有经典途径、凝集素途径、替代途径等三种激活途 径。根据补体系统各成分的生物学功能，可分为补体激活的固有成 分、补体的调节成分以及补体受体(CR)，其中大部分是分子量较大 的蛋白。一般情况下，血液中的补体成分无法通过血脑屏障(Blood brain barrier，BBB)。研究表明脑内补体由神经元、小胶质细胞、星 形胶质细胞、少突胶质细胞以及内皮细胞等产生。目前发现颅内细 胞产生的补体与AD发病密切相关。在AD患者大脑中，研究者发 现补体经典途径早期成分C1、C2、C4等和补体活化最终形成的攻 的替代通路也与AD的病理损害相关。Lanzrein等人在AD患者与正 常对照组外周血清中，发现甘露聚糖结合凝集素并未有显著差异， 但是在脑脊液中，AD患者甘露聚糖结合凝集素却有明显降低，支持 凝集素途径也参与AD的发病。然而补体各成分在AD发病中所起 作用目前仍不甚清楚。clq是构成补体经典途径第一成分Cl的重要 成分。clq与免疫复合物结合，即可启动补体经典通路的活化。近年 来对补体clq的研究发现其在AD发病中可能起着多种作用。部分 学者认为clq在AD发病中起着毒性作用：clq通过与Ap多价结 合，促进老年斑的成核过程。而部分学者则认为clq具有保护作 A13，可以保护神经元免受Ap所致神经毒性。但是目前国内外尚无 P301S突变的转基因小鼠，在6个月龄时病理学上即出现双螺旋细 丝(Pm)、突触蛋白的丢失以及小胶质细胞的活化，9个月龄时出 现神经原纤维缠结(NFTs)以及海马体积的缩小，是目前研究Tau蛋 白病的理想动物模型。clq．／-小鼠系为clqA链敲除小鼠系，广泛用 于clq的相关研究中。为了探讨clq蛋白对Tau蛋白的影响及其机 制，本课题拟首先建立Tau+／clq．／．双转基因小鼠模型。 目的：建立Tau+／clq．／-双转基因小鼠模型，为探讨clq蛋白对 Tau蛋白的影响及其机制研究提供实验基础。 19小鼠系 S)PS 方法：分别传代培养B6C3．Tg(Pmp-MAPT*P301 小鼠进行基因型鉴定获得clq+／．、Tau+／clq+／．两种基因型小鼠；第 杂交传代，第二代小鼠行基因型鉴定。 结果：第一代小鼠经基因型鉴定获得clq+／-、Tau+／clq“两种 基因型小鼠；对第二代小鼠基因型分析，最终得到clq+件、clq+／- 选取同代、具有相同遗传背景的以下三种基因型小鼠作为实验组及 ／I。 III 结论：成功构建Tau+／clq．／．双转基因小鼠模型，并获得足够数 量的实验组及对照组小鼠。 关键词：阿尔茨海默病；Tau蛋白；补体；clq；转基因小鼠； 第二部分 Tau+／clq-／-双转基因小鼠脑内磷酸化Tau蛋白表达检测 背景：神经细胞内的神经原纤维缠结(neurofibrillary