纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞B16毒性和代谢研究.pdf

纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞（B16）的毒性和代谢的研究 中文摘要 I 中文摘要 纳米氧化锌颗粒（Zinc Oxide nanoparticles，ZnO NPs），是近年来在生产工艺 和检测方法上最为成熟的纳米材料之一，它的独特的颜色效应、光催化作用及散 射和吸收紫外线的能力，使其成为一种倍受人类青睐的纳米材料，越来越广泛的 应用于人们的生产生活当中，因此对于其生物安全性的研究势在必行。然而总结 近年来对于纳米材料的安全性评价工作的进展发现，对于人们现今应用较广的 ZnO纳米材料的生物安全性研究较少。另一方面，有研究表明 ZnO NPs可能进入 皮肤，有帮助治疗皮肤疾病，所以我们的研究重点是 ZnO NPs对皮肤中的黑素瘤 细胞所产生的细胞生物效应，看其是否会对黑素瘤细胞产生不可逆转的损伤，并 从细胞凋亡的机理上分析 ZnO NPs损伤细胞的机制以及是否对黑素瘤细胞分化产 生影响，并从基因水平上分析 ZnO NPs影响细胞分化的机制，为评价 ZnO NPs 在 皮肤疾病治疗和化妆品方面的应用提供数据。首先使用 X 射线衍射（X-ray diffraction，XRD）、透射电子显微镜（Transmission electron microscope，TEM）、 电动电位（Zeta potential）对实验中所使用的不同粒径 ZnO NPs进行详尽表征，为 类似的研究工作提供了一套标准的材料表征方法。以小鼠黑素瘤细胞（B16）为细 胞模型，研究了 15 nm、30 nm、90 nm ZnO对 B16细胞的体外细胞生长和代谢的 影响作用及其作用机制。以不加纳米氧化锌和加体相氧化锌的处理结果分别作阴 性和阳性对照。结果发现，15 nm、30 nm、90 nm ZnO在 2～16 μg /ml浓度下与 B16 细胞共培养作用 72 h后，在 4 μg /ml以下，ZnO NPs并未明显抑制细胞生长， 引起细胞死亡。当作用浓度大于 8 μg /ml时，明显抑制细胞生长。随 ZnO NPs浓 度的增加，细胞体积变小，细胞间隙变大，粘附性降低，细胞变圆，从培养瓶底 脱落死亡。倒置显微镜、电镜切片实验观察以及流式细胞仪检测等实验手段定性 和定量研究了 ZnO NPs 对小鼠黑色素瘤细胞凋亡影响。实验中使用碘化丙啶 （propidium iodide，PI）对细胞单一染色，并用流式细胞仪检测发现 15 nm ZnO作 用细胞 24 h后，凋亡细胞的数量为 11.79%，明显高于正常对照组 0.57%。DNA琼 脂糖凝胶电泳和彗星实验得到了类似的结果，DNA 受损。另外丙二醛（malondi- 中文摘要 纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞（B16）的毒性和代谢的研究 II aldehyde，MDA)含量和活性氧水平检测实验中发现 ZnO-NPs的刺激可以使细胞产 生大量脂质过氧化物和活性氧，致使细胞产生氧化损伤，导致细胞经历线粒体介 导的内源途径凋亡死亡。另一方面，由胞外实验得出结果，ZnO NPs 和体相 ZnO 在 细胞外对蘑菇酪氨酸酶的活性和多巴的氧化都没有显著性影响。而 ZnO NPs诱导 细胞中酪氨酸酶（Tyrosinase，TYR）、酪氨酸相关蛋白 1（Tyrosinase-related protein 1，TYRP-1）、酪氨酸相关蛋白 2（Tyrosinase-related protein 2，TYRP-2）的 mRNA 的表达量升高，导致细胞内酪氨酸酶活性水平增高，最终导致细胞内黑色素生成 含量升高。相同浓度下，粒径 15 nm ZnO NPs比 30 nm、90 nm 尺寸的 ZnO NPs 作用明显。所以推断其作用机制可能是 ZnO NPs通过影响酪氨酸酶、酪氨酸酶相 关蛋白的基因表达进而影响酪氨酸酶活性进而影响黑色素生成。所以我们认为 15 nm、30 nm、90 nm纳米 ZnO在浓度大于 8 μg /ml可以抑制 B16细胞的增殖，增 加细胞凋亡，影响了 B16黑素瘤细胞的代谢，粒径越小作用越强。 关键词：纳米 ZnO；小鼠黑色素瘤细胞；生长；酪氨酸酶；黑色素；代谢 作 者：周 霞 指导教师：许维岸 纳米氧化锌对小鼠黑色素瘤细胞（B16）的毒性和代谢的研究 英文摘要 III The Research of nanosized zinc oxide particles on the cytotoxicity and metabolic of B16 melanoma cells from mice Abstract Zinc Oxide nanoparticles are one of the most mature of nanomaterials on the pro- duction process and te