细菌数量测定---标准平板计数法概念.pptVIP

细菌数量测定---标准平板计数法 一、实训目的 1、掌握菌液稀释的方法和步骤。 2、掌握浇混接种的操作步骤。 3、掌握菌落计数的原理与方法 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中的一个单细胞。 二、实训原理 统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。 三、实训仪器和材料 1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，电热套、托盘天平 吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、试管架、酒精灯 2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水 四、实训步骤 （一）培养基配制与灭菌 1.生理盐水：180mL/2组 →分16支 （9mL/支）→加塞包扎灭菌 2.营养琼脂培养基：330mL/2组 →加热煮沸→溶解→调pH=7.2±0.2 →分4个 →加塞包扎灭菌 (二)仪器包扎（每组用量） 培养皿7套 1mL吸量管7支，包扎灭菌 （三）菌液稀释 1、编号 （1）无菌平皿7套，分别标记为10-4、10-5、10-6各2套，留一平皿做空白对照。 2、标记 (2）6支盛9mL生理盐水的灭菌试管一次标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6 （四）浇混接种 1、取样：用3支无菌吸管分别精确吸取10-4、10-5、10-6的的稀释液0.2 mL，对号放入编好号的培养皿中。 2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基约15~20 mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，于37℃培养箱中倒置培养24h。 （五）计数 取出平皿，观察并计算菌落数。一般选择平皿上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的菌落数最合适。 算出同一稀释度2个平皿上的菌落平均数，并按下列公式计算： 活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5 检验结果 活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5 稀释度 10-4 10-5 10-6 菌落数 1 2 平均 1 2 平均 1 2 平均 活菌数/mL