生技实验指导要点.doc

实验一 培养基母液的配制 一、实验目的与意义 学习大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类母液的配制方法。 在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物类、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。 二、实验用具和药品 电子天平（感量为1/1000g、1/10000g）、烧杯（500mL、100mL）、容量瓶（100mL、500mL、1000mL）、药匙、称量纸、小玻璃棒、电磁炉。 配制各种母液所需药品、1MHCl、95%乙醇。 三、实验步骤 （一）大量元素母液的配制（10×） 按照培养基配方的用量，把各种化合物的用量扩大10倍，用1/1000g感量的天平分别称取，用蒸馏水将CaCl2除外的其它化合物溶解后倒入1000mL容量瓶中，最后向容量瓶中缓缓加入溶解的CaCl2，以免形成沉淀。用蒸馏水定容到1000mL。 表1 MS培养基大量元素母液制备 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大10倍用量(mg) ? 1 NH4NO3 1650 16500 ? 定容至1000ml 2 KNO3 1900 19000 3 KH2PO4 170 1700 4 MgSO4·7H2O 370 3700 5 CaCl2·2H2O? 440 4400 （二）微量元素母液的配制（100×） 配成两种母液：母液Ⅰ、母液Ⅱ。 母液Ⅰ的配制：用1/10000g的电子天平分别称取CuSO4·5H2O和?CoCl2·6H2O各50mg，用蒸馏水溶解后倒入100mL容量瓶中定容。 母液Ⅱ（微量元素母液）的配制：将其余微量元素化合物按照培养基配方用量的100倍，用1/10000g的电子天平分别称取，用蒸馏水溶解，待全部溶解后倒入容量瓶中，用移液管吸取5mL母液Ⅰ加入容量瓶中，最后用蒸馏水定容到1000mL。 表2 MS培养基微量元素母液Ⅰ的配制 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大2000倍用量(mg) 1 CuSO4·5H2O? 0.025 50 定容至100mL 2 CoCl2·6H2O?? 0.025 50 表3 MS培养基微量元素母液的配制 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大100倍用量(mg) 1 KI 0.83 83 定容至1000mL 2 Na2MoO4·2H2O 0.25 25 3 MnSO4·4H2O 22.3 2230 4 ZnSO4·7H2O 8.6 860 5 H3BO3 6.2 620 6 CuSO4·5H2O? 母液Ⅰ 取5mL 7 CoCl2·6H2O?? （三）铁盐母液的配制（100×） 目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。配制方法是：按培养基配方用量的100倍，用1/100g的天平称取FeSO4.7H2O和Na2-EDTA，分别用蒸馏水溶解，在沸水浴中将两种溶液混合，冷却后定容到1000mL。 表4 MS培养基铁盐母液的配制 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大100倍用量(mg) 1 Na2-EDTA? 37.3 3730 定容至1000mL 2 FeSO4·7H2O? 27.85 2785 （四）有机物母液的配制（100×） 按照培养基配方用量的100倍，用1/10000g的电子天平分别称取。用蒸馏水溶解，待全部溶解后倒入容量瓶中，用蒸馏水定容到1000mL。 表5 MS培养基有机物母液的制备 序号 化合物名称 培养基浓度（mg/L） 扩大100倍用量(mg) 1 甘氨酸 2 200 定容至1000mL 2 盐酸硫胺素(VB1) 0.4 40 3 盐酸吡哆素(VB6) 0.5 50 4 烟酸 0.5 50 5 肌醇 100 10000 （五）激素母液的配制（1mg/10mL） 激素在培养基中的用量较少，为了使用方便和准确，也应配成母液备用。激素一般不易溶于水，所以要借助助溶剂，不同激素用的助溶剂不同： 1. 配制生长素类，例如IAA、NAA、2.4-D、IBA，应先用少量95%乙醇充分溶解，或者用1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水定容到一定的浓度。 2. 细胞分裂素，例如KT，6-BA应先用少量1mol/L的盐酸溶解，再用蒸馏水定容。 3. 配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。 注意：所有的母液都应保存在0~4℃冰箱中，若母液出现沉淀或霉团则不能继续使用。 四、作业 1．第一组同学配制大量元素（10×）和6-BA母液；第二组同学配制微量元素（100×）和2,4-D母液；第三组同学配制有机物（100×）和NAA母液；第四组同学