14DNA的生物合成-2014研讨.ppt

RNA病毒在细胞内复制成双链DNA的前病毒(provirus)。前病毒保留了RNA病毒全部遗传信息，并可在细胞内独立繁殖。在某些情况下，前病毒基因组通过基因重组(recombination)，参加到细胞基因组内，并随宿主基因一起复制和表达。这种重组方式称为整合(integration)。前病毒独立繁殖或整合，都可成为致病的原因。 逆转录酶催化的cDNA合成 分子生物学研究可应用逆转录酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为cDNA法。 以mRNA为模板，经逆转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。 试管内合成cDNA: cDNA ?complementary DNA? 逆转录酶 A AA A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱水解 T T T T 二、逆转录的发现发展了中心法则 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 三、真核生物线粒体DNA按D环方式复制 dNTP DNA-pol γ D环复制(D-loop replication) 是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。 三、真核生物线粒体DNA按D环方式复制 D-环复制时需合成引物。mtDNA为双链，第一个引物以内环为模板延伸。至第二个复制起始点时，又合成另一个反向引物，以外环为模板进行反向的延伸。最后完成两个双链环状DNA的复制。复制中呈字母D形状而得名。 D环复制的特点是复制起始点不在双链DNA同一位点，内、外环复制有时序差别。 总结 DNA复制的基本规律 半保留复制、双向复制、半不连续复制的定义、DNA保真性的酶学依据。 原核生物和真核生物双向复制有何区别 冈崎片段 DNA复制所需要的酶和蛋白因子及其功能 DNA聚合酶的特点、Klenow fregment DNA合成所需要的原料（dNTP, 模板，引物，酶和蛋白因子） 原核生物DNA复制的过程 真核生物和原核生物的区别 引发体、端粒、端粒酶 逆转录定义、逆转录酶的作用 滚环复制和D环复制。 DNA聚合酶（原核和真核）种类和功能 引物酶；解螺旋酶；拓扑异构酶；DNA连接酶； SSB蛋白 5 3 5 dATP dGTP dTTP dCTP dTTP dGTP dATP dCTP OH 3 3 DNA-pol 领头链的合成： 领头链的子链沿着5?→3?方向可以连续地延长。 后随链的合成 在复制叉同时合成前导链和后随链 复制过程简图 原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。 ori ter E.coli 82 32 ori ter SV40 50 0 三、复制的终止 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 子链中的RNA引物被取代 真核生物DNA生物合成过程 The Process of DNA Biosynthesis in eukaryotes 第 四 节 真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等； DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶?/?转换； 真核生物与原核生物DNA复制的差异： 哺乳动物的细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 一、真核生物复制的起始与原核基本相似 增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标。 拓扑异构酶，去除负超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除复制叉前方产生的正超螺