实验五观察细胞中DNA和RNA的分布研讨.ppt

实验三 观察DNA和RNA在细胞 中的分布 原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。 Unna染色法： Unna染色法：　　1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁（mehtyl-green-pyronim）染色法。1902年Unna对这一方法进行了改良。1940年Brachet研究证明用甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后，由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同， 而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。 DNA被甲基绿染成绿色，RNA被哌洛宁染成红色， 这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。 实验目的 1、学会准备本实验。 2、练习并熟练掌握本实验操作过程。 3、学会指导学生实验。 ［课前准备］ 1、实验材料用具：人的口腔上皮细胞或蚕豆叶表皮，洋葱表皮 大烧杯，小烧杯，温度计，滴管，消毒牙签，载玻片，盖玻片，铁架台，石棉网，火柴，酒精灯，吸水纸，显微镜 2、质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为0.8%的盐酸，吡罗红甲基绿染色剂（取A液20 mL,B液80 mL配成染色剂，使用时现配。A液：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入100 mL蒸馏水中溶解，放入棕色瓶中备用。B液：取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1 000 mL。取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL。取稀释的乙酸钠溶液30 mL和乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的溶液），蒸馏水。 Unna试剂 甲液5%派洛宁水溶液，6ml 2%的甲基绿水溶液，6ml 蒸馏水，16ml 乙液，1mol/L乙酸钠，16ml 用时混合。 乙液，1mol/L乙酸钠， A、取乙酸6 mL---100mL B、乙酸钠13.5 g--- 100mL A 40mL+B 60ml即可。 学生预习实验。 学生预习实验。 （一）老师介绍实验的原理以及科学认识的模式 原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA与蛋白质分离，有利于DNA和染色剂结合。 科学认识模式是“假设检验”，即在提出问题后，接着提出猜测性的假设，然后用观察和实验来检验。这种科学认识模式的程序是问题→试探性假设→批判与检验。这是科学探究的一般程序，也是探究性学习的一般程序。 （二）找一个预习作业做得比较好的同学， （二）找一个预习作业做得比较好的同学，陈述实验如何进行 A.问题的提出：DNA和RNA在细胞中是怎么分布的？ B.试探性假设：DNA分布在细胞核，RNA分布在细胞质。 C.实验检验：甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色，通过观察两种颜色出现的部位来判断DNA和RNA在细胞中的分布。 实验方法步骤 1.取口腔上皮细胞 （1）在洁净的载玻片上，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液。 （2）用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片的液滴中涂抹几下。 （3）点燃酒精灯，将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。 2.水解 （1）在小烧杯中加入30 mL质量分数为8%的盐酸，将烘干的载玻片放入小烧杯中。 （2）在大烧杯中加入30 ℃温水。 （1）用吸水纸吸去载玻片上的水分。 （2）将吡罗红甲基绿染色剂滴2滴在载玻片上，染色5 min。 （3）吸去多余染色剂，盖上盖玻片。 5.观察 ① 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰； ② 高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。 洋葱表皮细胞 结论：通过各种动植物实验材料的观察，同学们观察到的结果非常相似，在细胞核部分被染成了绿色，而在细胞质部分被染成了红色。说明DNA主要分布在细胞核中，RNA主要分布在细胞质中。 注意事项  1.材料的选择 ① 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察； ② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞) 2.取材要点 ① 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质； ② 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。 3.冲洗载玻片时