小窝蛋白1对A549细胞磷酸胆碱二胞苷酰转移酶影响及作用机制初探.pdfVIP

摘要 目的：观察小窝蛋白．1(caveolin．1)对A549细胞磷酸胆碱二胞苷酰转 移酶(CTP)表达的影响：探讨核因子r．B(NF．1出)信号转导途径在 磷酸胆碱二胞苷酰转移酶合成中的作用，为临床有关呼吸系统疾病的 研究提供依据和参考。 方法：以研究肺表面活性物质常用的A549细胞作为研究对象，运用 小分子RNA干扰(siRNA)的方法构建小窝蛋白．1低表达模型；并用蛋 白印迹法(western blot)检Nd,窝蛋白．1的表达变化；实验分组如下： ①按量效关系分组：siRNAN浓度为1．09moYl、3．0pmoUl、5．09moUl； ②按转染时间分组：0h组、24h组、48h组、72h组；③选取5．0斗moYl 的siRNA，转染时间为72h分组：为转染试剂组，siRNA处理组，错 义链RNA组；④按小窝蛋白．1对磷酸胆碱二胞苷酰转移酶表达影响 分组：转染试剂组(正常对照组)，siRNA处理组(实验处理组)，错 义链RNA组(阴性对照组)；⑤NF．r．B表达分组：转染试剂组，siRNA 处理组，错义链组；其他实验条件均相同。之后对其进行总蛋白的提 取，随后蛋白印迹法检测磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的表达；最后对核 蛋白进行提取并检测核蛋白P65的表达。 结果： 1．浓度分别为1．09mol／l，3．0“mol／l，5．0ptmol／1的siRNA孵育细胞后， 5．01．tmol／l的siRNA与1．09mol／l的siRNA条带相比小窝蛋白-1的表达 降低。 2．于0h，24h，48h，72h分别孵育细胞后，72h组与0h组相比小窝蛋 白．1的表达降低。 3．5I_tmogl siRNA，转染细胞72h，小窝蛋白．1表达下降，转染组与错 义链组相比，小窝蛋白一1的表达降低。 4．蛋白印迹法检测磷酸胆碱二胞苷酰转移酶表达下降：转染组相对错 义链组小窝蛋白一l的表达明显降低。 5．提取A549细胞核蛋白后蛋白印迹检测胞核蛋白p65，胞核蛋白p65 表达下降。转染组相对错义链组p65表达明显降低。 结论： 1．／J、窝蛋白．1低表达模型构建成功。 2．／J、窝蛋白．1的表达减少可引起磷酸胆碱二胞苷酰转移酶的表达下 降。 3．胞核P65表达下降，提示小窝蛋白．1下降引起磷酸胆碱二胞苷酰转 移酶表达减少与NF．1cB的活化减少有关。 2．关键词：小窝蛋白．1；肺损伤；磷酸胆碱二胞苷酰转移酶 Ⅱ ABSTRACT Objective：To observe effects of caveolin-1 on phosphocholine cytidyl yltransferase，investigated the expression of p65 protein,further exp lored the mechanism of caveolin-1 on phosphocholine cytidylyltransf erase．To provide reference for mechanism of lung injury． Methods：The A549 cell line as a research vehicle，used the method of small interference RNA and the method of western blot to study the effects of caveolin-1 on CTE For example，the cells were divided into three dose groups，which were l tx mol／1，31xmol／l，5I_tmol／l；accorded with the transfected time the cell were divided four groups，which respectively were 0h group，24h group，48h group，72hgroup；according to the different processing factors，the cell were divided three groups：one group added the same amount of normal saline(normal control group)，another group added siRNA(experimental group)，another group added missense chain RNA(negative control group)；the other experimental conditions are the same．To extract th