第十三章发酵产物分离原理与技术分解.ppt

主讲：鲍成满 第十三章 发酵产物分离原理与技术 第一节 沉淀分离法 第二节 吸附和树脂分离法 第三节 离子交换法和离子交换膜电渗析分离法 第四节 萃取与浸取分离法 第五节 膜分离技术 第一节 沉淀分离法 沉淀是物理环境的变化引起溶质的溶解度降低，生成固体凝聚物的现象。 沉淀法方法简单、成本低、使用广泛，一般作为初步分离的手段。 沉淀法的分类： 等电点沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀法 一、等电点沉淀法 原理：利用两性电解质在等电点时溶解度最低 优点：许多蛋白的等电点都在偏酸范围内，而许多无机酸的价格低廉，并能为食品标准允许 缺点：酸化时易引起蛋白失活。 等电点沉淀法的适用范围： 明确pI的两性物质 疏水性较大的蛋白质 蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低，发生沉淀的现象称为盐析。 二、盐析法 原理： ①降低蛋白表面的双电层，导致蛋白质溶解度下降； ②暴露疏水区，增加疏水相互作用； 盐析原理 图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图 蛋白质的溶解度与盐浓度间的关系可用Cohn方程式表示： logS/S0 = －Ks·I logS=β-KsI S — 离子强度为I时的蛋白溶解度 (g/L); S0 — 纯溶剂（即I = 0）时蛋白的溶解度； Ks — 盐析常数，与温度和pH无关； I — 离子强度 当温度一定时，S0对于某一溶质是一常数，即logS0 = ? ?是溶质的特征常数，对于蛋白质而言，其大小主要取决于不同蛋白质的性质，它也与溶液的温度和pH值有关，但与盐的种类无关。 2、盐析的主要影响因素 蛋白质种类、浓度 无机盐种类和强度 温度 pH 几种蛋白质析出时所需硫酸铵的离子强度 离子强度和种类: 许多蛋白在低盐浓度下发生盐溶现象（比在纯水中的溶解度大大增加）。 高盐浓度则盐析，离子强度越大，蛋白质的溶解度越低； 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25℃）(○)NaCl; (▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)（NH4)2SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)柠檬酸三钠 温度和pH值的影响 温度对碳氧血红蛋白盐析曲线的影响 温度是影响溶质溶解度的重要因素，升高温度可以增加许多无机盐和小分子有机化合物的溶解度 pH值对β的影响 三、有机溶剂沉淀法 许多有机溶剂如丙酮、乙醇、甲醇等能使溶于水的小分子生物物质以及核酸、多糖、蛋白质等生物大分子发生沉淀作用。 1.原理： 有机溶剂能降低溶液的介电常数，使溶质分子间因引力而凝集；或破坏水膜(降低水活度)而溶解度降低；或破坏蛋白质的某种键，改变其空间结构而使疏水基团暴露而析出。 2.影响有机溶剂沉淀的因素: 溶剂的种类和数量：丙酮乙醇甲醇 沉淀的温度：温度越低沉淀越完全，保护生物物质的活性 pH：溶解度最低时的pH，有助于提高沉淀效果；在接近等电点处，引起沉淀所需有机溶剂的量最小；合适的pH还可大大提高分离的分辨能力 样品浓度等 3、有机溶剂沉淀法的优缺点 优点：分辨能力较高，一种溶质只在一个比较窄的有机溶剂范围内沉淀；沉淀无需脱盐；有机溶剂密度低，与沉淀物密度差大，易进行固液分离；有机溶剂易挥发，不会在成品中残留。 缺点：易引起蛋白变性；易燃、易爆 第二节 吸附和树脂分离法 在发酵工业的下游加工过程中，吸附法应用于发酵产品的除杂、脱色、有毒物质和抗生素的提纯精制。 吸附：是溶质从液相或气相转移到固相的现象。 吸附剂：吸附操作使用的固体，一般为多孔微粒，具有很大的比表面积，这类物质就是吸附剂。 脱附：吸附的逆过程 一、吸附原理及过程 吸附法是利用吸附剂与杂质、色素物质、有毒物质、产品之间分子引力的差异，从而起到分离的作用。 待分离料液与吸附剂混合、吸附质被吸附到吸附剂表面、料液流出、吸附质解吸回收 二、吸附的类型 物理吸附：吸附剂和吸附物通过分子力(范德华力)产生的吸附。 化学吸附： 化学吸附是由于吸附剂在吸附物之间的电子转移，通过化学键作用而产生的，属于库仑力范围。 离子交换吸附： 吸附剂表面如为极性分子或离子所组成则它会吸引溶液中带相反电荷的离子而形成双电层。这种吸附又称为极性吸附。 三、吸附剂 1 吸附剂的要求 吸附剂不能溶于操作的溶液中 颗粒密度小，表面积大，但孔隙也不能太多，否则被吸附物质不易被洗脱 吸附剂的颗粒大小要均匀 吸附剂的吸附能力要大，容易被洗脱 2 吸附剂的类型 工业用吸附剂主要有三类型: 疏水或非极性吸附剂