异亮氨酸发酵课件.pptVIP

杨硕 李旭东 欧毅 什么是异亮氨酸？ L—异亮氨酸用途： L—异亮氨酸 异亮氨酸的合成途径及调节机制 L—异亮氨酸的生产方法 L—异亮氨酸的生产概况 L—异亮氨酸高产菌应具备的生化特征： L—异亮氨酸产生菌的选育方法： 几个重要名词解释： L—异亮氨酸产生菌的选育实例： 代谢工程与L--异亮氨酸工程菌的构建： 代谢工程与L--异亮氨酸工程菌的构建： 发酵法生产L—异亮氨酸： 异亮氨酸又称“异白氨酸”，系统命名为“α -氨基-β-甲基戊酸”。是人体必需氨基酸之一，属脂肪族中性氨基酸的一种。化学式：CH3CH2CH(CH3)CH(NH2)COOH。分子量：131.17 。菱形叶片，异亮氨酸状或片状体，味苦。熔点：284摄氏度。溶于水，微溶于乙醇。亮氨酸与异亮氨酸和缬氨酸由于有甲基侧链，故称为分枝链氨基酸。他们一起合作修复肌肉，控制血糖，并给身体组织提供能量，也是生物体成分的前体。 如图：由于在α为和β为存在两个不对称 的碳原子，因而存在D、L、D别和L别四 种旋光异构体。但是自然界中存在的是 L—异亮氨酸，而且其余三种均无营养价 值，所以，今天我们来看看L—异亮氨酸 是合成人体激素、酶类的原料,具有促进蛋白质成和抑制其分解的效果,在人体生命活动中起着重要作用,因此,在食品和医药行业具有广泛的应用及商业价值。 食品方面：主要用于食品强化,使各种氨基酸平衡,提高食品的营养价值。 医药方面：3 种支链氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸) 组成的复合氨基酸输液以及大量用于配置治疗型特种氨基酸的药物,如肝安、肝灵口服液,对治疗脑昏迷、肝昏迷、肾病等具有显著疗效,并可取代糖代谢而提供能量,是比较昂贵的氨基酸原料药之一。 近年来的研究表明,L2异亮氨酸是一种高效的β2防御素表达的诱导物,在诱导上皮防御素表达上起着重要作用,作为一种免疫刺激物,对粘膜表面的防御屏障在临床上将起到重要的支持作用 。 L—异亮氨酸的生产方法 L—异亮氨酸的生产概况 异亮氨酸产生菌育种策略及实例 代谢工程与L--异亮氨酸工程菌的构建 发酵法生产L—异亮氨酸 PC：磷酸烯醇式丙酮酸酶羧化酶 AK：天冬氨酸激酶 HD：高丝氨酸脱氢酶 TD：苏氨酸脱氢酶 AS：乙酰羟基酸合成酶 HT：高丝氨酸激酶 添加前体物发酵法： 这种是利用葡萄糖作为碳源和能源，再添加特殊前体物质，经过微生物作用将其转化为目标氨基酸的方法。 这种方法可以避免生物合成途径中的反馈调节，但是其前体物质成本太高。 直接发酵法： 借助微生物具有合成自身所需的氨基酸的能力，对其进行诱变处理，选育出营养缺陷型或氨基酸类似物抗性突变株，解除代谢调节中的反馈调节和反馈抑制，过量积累目的氨基酸。 2 1 L—异亮氨酸的生产方法有提取法、化学合成法和发酵法三种，由于化学合成法产生的异构体难分离，所以目前厂生产上实施的主要是发酵法，也就是利用微生物的代谢作用，其又包括一下两种： 生产技术指标 中国 日本 产酸率/(g/L) 20~25 30~35 对糖转化率/% 13~15 20~25 提取收率/% 60 60~75 目前国际上日本生产L—异亮氨酸占垄断地位，厂家 主要有味之素、协和发酵和田边制药，他们均是以 发酵法生产。 1、二氧化碳固定反应能力强 2、天冬氨酸合成酶能力强 3、天冬氨酸激酶活力强 4、高丝氨酸脱氢酶活力强 5、苏氨酸脱氢酶活力强 6、乙酰羟基酸合成酶活力强 7、二氢吡啶—2，6—二羧酸合成酶活力微弱或丧失 8、琥珀酰高丝氨酸转琥珀酰酶活力微弱或丧失 9、谷氨酸脱氢酶活力弱 ①、增加前体物苏氨酸的合成； ②、增加天冬氨酸 的合成。 强化二氧化碳固定反应、选育天冬氨酸结构类似物和磺胺胍抗性突变株。 ①、切断或者减弱支路代谢； ②、切断或者削弱赖氨酸合成支路； ③、切断或者削弱赖氨酸合成支路。 ①、选育抗结构类似物突变株； 可以选育苏氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、结氨酸结构类似物抗性突变株。 ②、营养缺陷型回复突变株的应用。 营养缺陷型：是指原菌株由于发生基因突变，导致合成途径某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某些物质的能力，必须在培养时外源补加营养物质才能生长的突变型菌株。 渗漏型突变株：是指以遗传性障碍不完全的缺陷型。 抗类似物突变株：也称为代销拮抗物抗性突变株，是目前代销控制发酵育种的主流。 营养缺陷型回复突变株：是指某一结构基因发生突变后，该结构基因所编码的酶就因结构的改变而失活，再经过第二次突变后，该酶的活性中心结构可以复原，而调节部位的结构常常并没有回复。 1、Shiio等首先由黄色短杆菌选育α—氨基β—羟基戊酸抗性突变株获得了AR1—129； 2、Ikeda等以产L—苏氨酸产生菌FAB—3—1为亲株选育乙硫氨酸抗