基因Hd16详解.pptxVIP

Hd16, a gene for casein kinase I, is involved in the control of rice flowering time by modulating the day-length response Kiyosumi Hori， Eri Ogiso-Tanaka，Masahiro Yano* 内 容 一、研究背景 二、技术路线 三、材料与方法 四、结果与讨论 五、学习借鉴 光照敏感性对于植物生长发育成熟具有关键性作用，尤其是当今一些大面积栽培作物，由于地域的光环境差异要求作物本身对各种环境的光周期反应具有较高适应性，以使在恰当的节气开花成熟。而近年来对光周期调控开花的机理已取得初步进展。 一、研究背景 水稻中光周期开花基因 Ko Shimamoto，Current Opinion in Plant Biology 2011 众多基因参与了光周期调控花期的复杂网络通路。 水稻中光周期诱导开花的分子网络 Ko Shimamoto，Current Opinion in Plant Biology 2011 光周期诱导开花途径主要有两条：与拟南芥类似的Hd1途径，水稻中特有的Ghd7、Ehd1途径。 光周期开花基因Hd16的挖掘 利用日本晴和越光米两亲本构建的两个BIL群体连锁分析作图初定位到的QTL其LOD分别为30.3、33.5，贡献率为0.63、0.67 。 K. Matsubara, Theor Appl Genet (2008) K. Matsubara, Theor Appl Genet (2008) 利用BC2F2群体进行精确定位，将其定位到1140kb范围内其LOD值为42.1，贡献率为0.89，加性效应5.4 。 光周期开花基因Hd16的精细定位 CHOON-TAK KWON，Plant, Cell and Environment (2013) 两亲本H143 和 M23构建的F7 RILs群体定位到包含Hd16的EH3，后精细定位到62kb大小，经候选基因分析与Hd16属同一基因。 序列分析比较发现H143/ M23两亲本是苏氨酸激酶结构域(147–441 aa)中Gly-159-Ala发生替换，而在日本晴和越光米两亲本间是Ala-331-Thr发生替换。 二、材料与方法 材料：日本晴,越光米,Hd16, Hd1, Ghd7, DTH8 和 Hd2相应的功能缺失型NILs 群体。 方法：农杆菌介导转化、实时定量PCR、GST 亲和层析、酵母双杂交检验。 三、技术路线 Hd16精细定位 候选基因分析 互补分析验证 确定基因Hd16 生物钟开花基因 光周期开花基因 开花信号转导通路 四、结果 两亲本及对应Hd16的两个BIL群体基因型和表型 N-NIL(Hd16)与Nipponbar比较，短日照下花期延期3天长日照下花期提前20天 ；K-NIL(Hd16)与 Koshihikari比较，短日照下花期提前2天长日照下花期延期19天。 Hd16的精细定位与图位克隆 利用BC4F3群体(2918)将目标区段缩小到29.4kb范围，其内有4个开放可读框，进行两亲本间的序列比对发现只在Os03g0793500基因内有一个非同义突变SNP ：Ala-331-Thr Hd16的互补分析验证 将日本晴的Hd16转基因到越光米中，T2代在短日照下花期提前5天，在长日照下花期延后11天；对日本晴进行RNAi干扰实验中，T2代在短日照下花期延后2天，在长日照下花期提前15天。 Hd16与光周期开花基因间的相互作用 光周期开花基因Hd1, Ghd7,DTH8 和 Hd2相应的功能缺失型BILs群体和Hd16类似在长日照下都会导致提前开花。说明在长日照下Hd16参与了Hd1, Ghd7,DTH8 , Hd2光周期调控开花的通路。 Hd参与的光周期调控开花通路的表达模式 Hd16的不同对OsLHY, OsPRR1, OsGI, DTH8, Ghd7,Hd1,Ehd1,Hd3a and RFT1表达量的影响，以Hd3a、Ehd1、 RFT1最为显著。已知 Ehd1 是 Hd3a、RFT1的转录因子，这说明Hd16参与了Hd3a, Ehd1, RFT1的下游调控通路。 已知Ghd7第68位丝氨酸残基被预测为磷酸化位点。利用GST亲和层析实验验证日本晴中的Hd16对Ghd7有磷酸化作用，而越光米中的Hd16对Ghd7无磷酸化作用。 Hd16对Ghd7的磷酸化作用 利用常见的CKI底物卵黄高磷蛋白通过GST亲和层析验证Hd16的磷酸化活性。越光米中的Hd16活性较弱。 酵母双杂交实验验证Hd16对Ghd7的作用