酶的提取与分离纯化精读.ppt

* 实验设计原理 利用不同的蛋白质分子在溶液中所带电荷不同，因而与离子交换剂有不同吸附力而分离。 pH6.0 pI 6.0 蛋白质带正电 pI 6.0 蛋白质带负电 * 2. 阴离子交换剂分离蛋白质的过程 平衡 吸附 去吸附 分离结束 再生 + 低盐 高盐 利用不同盐浓度将不同蛋白质洗脱下來 Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- Cl- * Ion-exchange chromatography * 3. 操作 平衡 上样 平衡 洗脱 再生 1）上样：上样体积不十分严格。 2）洗脱: 增加溶液的离子强度 梯度洗脱法 改变溶液的pH值 3）再生：用0.5mol/LNaOH和0.5mol/L NaCl混合溶液或0.5mol/L HCl处理。 4.应用 制备纯化生物大分子 * 图4-39 梯度溶液的制备方法和洗脱曲线 （a）线性梯度；（b）凸形梯度；（c）凹形梯度；（d）编程梯度 * 影响离子交换层析的主要因素 PH 离子强度 层析介质（流速、分辨率） * （三）疏水层析（Hydrophobic Interaction Chromato