酶联免疫吸附法在乳品中的应用.doc

酶联免疫吸附法在乳制品检测中的应用 摘 要: 简单介绍了酶联免疚吸附法（ELISA）,并且就其在乳制品检测中的应用进行了较详细的评述,主要包ELISA用于乳制品中的免疫球蛋白、乳铁蛋白、微生物及其他成分的测定。 关健词：酶联免疫吸附法，乳制品，检测 Abstract:The enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) were introduced briefly,and application of ELISA in milk products analysis were also studied, including the determination of immunoglobulin, laotoferrin, microorganism, as well as the other components. Keywords: ELISA ,milk products ,determination 1 引言 我国的食品安全问题已不再单纯的是一般的质量问题，食品自然甚至人为地污染日趋多样化和复杂化，紧抓食品安全控制成为了关系国计民生的大事，人民和政府的高度重视迫使食品科技不断增加新的检验项目，特别是随着生活质量的提高，人们对于乳制品的需求越来越大，乳制品的安全检测问题也就越发突出。利用新的科技手段不断提高检验水平、质量和效率。现今，食品安全检测正朝着快速、灵敏、简便的方向发展。酶联免疫技术正是迎合了这一方向而被越来越多地应用于乳制品检验领域的。 2 酶联免疫吸附法的概述 酶联免疫吸附(Enzyme-Linked Immunes or bent Assay,简称ELISA),又称酶标法,是在目前,ELISA技术已广泛应用在临床医学、兽医学、生物学等领域的检测中,但在食品安全领域中应用相对较少。因此ELISA在食品安全检测中的应用仍有待于进一步的深入研究。由于ELISA检测技术特异性高、灵敏性强,并且食品安全问题日益受到消费者、学术界和各级政府的密切关注,所以ELISA在食品安全检测中的研究和应用也越来越多。本文主要对ELISA法原理、分类及在检测中的应用进展进行了综述,希望能对ELISA在检测中的发展起到一定的作用。,使之固相化后，结合在固相载体表面的抗原或抗体既保持其免疫学活性又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开,再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析[2]。 3.2 ELISA 的测定方法及分类 ELISA技术可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。ELISA技术主要分为： (1)间接法测定抗体:将特异性抗原包被在固相载体上,从而形成固相抗原, 加入待检样品(含相应抗体),抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物,再加入酶标记的抗抗体(又称二抗)与上述复合物结合,此时加入底物,复合物上的酶则与催化底物反应而显色,由于每步之间均有冲洗步骤。因此,若样品中不含相应的抗体,酶标抗体则将被洗掉,底物不显色而呈阴性反应;若样品中含相应的抗体,底物显色则呈阳性反应。 (2)双抗体夹心法测抗原:将已知的特异性抗体包被在固相载体上形成固相抗体,加入待检样品(含相应抗原),其中抗原与固相抗体结合成复合物,再加入特异性的酶标抗体,使之与已形成的抗原-抗体复合物结合, 当加入底物时,酶则催化底物而显色,根据颜色的有无和深浅,对待测抗原进行定性和定量分析。 (3)竞争法测抗原:将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体,加入待测样品(含相应抗原)和相应的一定量的酶标抗原,样品中的抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,待测样品中抗原含量越高,则与固相抗体结合的越多,使得酶标抗原与固相抗体结合的机会就越少,甚至没有机会结合,这样加入底物后就不显色或显色很浅,显色深者为阴性。 前面两种方法主要用于测定抗体和大分子抗原,通常用于临床诊断,而竞争法是测定小分子抗原的方法,适用于食品安全的检测。由于食品安全检测需测定的物质大都是低分子量的,但免疫动物产生抗体的抗原分子量要大(至少50000Da)。因此,首先小分子物质必须结合高分子蛋白质后才能作免疫检测之用。竞争法按实验操作原理的不同又可分成直接竞争法和间接竞争法, 研究者可根据自身的条件和实际要求, 灵活